Resumo |
Os equinos são animais poliestrais sazonais, sendo que a atividade reprodutiva é primariamente regulada pelo foto-período. O reflexo dessa sazonalidade sobre os gametas masculinos é demonstrado nas diferenças estruturais e integridade funcional da membrana plasmática dos espermatozoides. As diferenças circanuais afetam a composição e o conteúdo do plasma seminal, e alguns fatores presentes no plasma seminal interagem com a superfície dos espermatozoides, modificando as características de sua membrana, e um desses componentes são as proteínas. As proteínas do plasma seminal têm sido apresentadas como responsáveis por algumas etapas do processo de fertilização, como o estabelecimento das reservas espermáticas no oviduto, a modulação da capacitação e a interação entre gametas. A proteômica do plasma seminal dos garanhões usando eletroforese bidimensional (2-DE), espectrometria de massas e análise dos dados por bioinformática pode auxiliar no entendimento de fatores bioquímicos envolvidos na fertilidade e qualidade do sêmen. O objetivo desse trabalho foi avaliar o proteoma total do sêmen de garanhões em idade reprodutiva e então detectar variações no perfil proteico do plasma seminal entre as estações do ano, visando avaliar as consequências fisiológicas para o processo de reprodução de equinos. Após avaliações físicas do sêmen e retirada das amostras para exames complementares, os espermatozoides foram removidos do plasma seminal por centrifugação, e as amostras de plasma submetidas à separação por 2-DE. A focalização isoelétrica foi em sistema EttanIPGphor 3, em fitas de 24 cm e gradiente de pH entre 3 e 10. A segunda dimensão foi em SDS-PAGE em gel 14,5% T, e os géis foram corados com coomassie blue. Os géis foram digitalizados e analisados utilizando o programa Image Master 2D Platinum 7.0 (GE Healthcare, USA). Os spots de todas as proteínas presentes foram manualmente localizados, excisados, e as proteínas reduzidas, alquiladas e tripsinizadas. As amostras foram então analisadas em espectrômetro de massas MALDI-TOF/TOF (Ultraflex III - Bruker Daltonics), por MS e MS/MS. Como resultado, encontrou-se um conjunto de proteínas com abundância diferencial nas diferentes épocas do ano. As mesmas foram identificadas utilizando os programas MASCOT DAEMON e Peaks Studio 7.5 e as bases de dados UniProt, SwissProt, Equidae. Os dados estão sendo analisados com o auxílio das ferramentas de bioinformática associadas à plataforma ExPASy, String e Cytoscape, e já indicam diferenças significativas na presença de proteínas em estações propícias e não propícias à reprodução. Espera-se, por meio da relação da abundância das proteínas, o entendimento de vias metabólicas e eventos biológicos que sugiram procedimentos para a melhora do processo de reprodução de equinos. |