Resumo |
A produção de leite exerce um papel fundamental na economia nacional, gerando empregos e renda à população, principalmente aos pequenos e médios produtores. O Brasil destaca-se nesse setor com uma produção leiteira de aproximadamente 25,04 bilhões de litros por ano (IBGE, 2015). Essa produção pode ser impactada pela mastite bovina, principal doença do rebanho leiteiro, gerando perda econômica na produção. A mastite bovina apresenta como principal manifestação inflamações das glândulas mamárias. Staphylococcus aureus é um dos principais patógenos da mastite, causando frequentemente manifestações subclínicas que podem evoluir para a cronicidade. Uma vez que o patógeno se instala na glândula mamária, começa a se multiplicar, produzindo toxinas que causam a danificação do tecido do hospedeiro, comprometendo a produção de leite pelo animal. Neste trabalho, as estirpes de S. aureus causadoras de mastite bovina persistente (Sau 302 e Sau 469) e não persistente (Sau 322 e Sau 366) foram contrastadas por meio de uma abordagem proteômica visando um melhor entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na patogenicidade da doença. Extratos proteicos foram preparados de bactérias cultivadas até a fase de crescimento exponencial em meio RPMI 1640 suplementado com 0,15mM de deferoxamina, a 37°C, sob limitação de oxigênio (LE MARÉCHAL, et. al.,2011). O método de Bradford foi utilizado para quantificação proteica e amostras contendo 200 µg foram analisadas por eletroforese bidimensional em fitas Immobiline DryStrip de 13 cm, pH 4-7. Três repetições biológicas foram realizadas. Detectaram-se entre 191 e 265 spots para cada estirpe, sendo oito spots considerados exclusivos de Sau 302 mediante comparação às estirpes não persistentes, Sau 322 e Sau 366, e várias com abundância diferencial entre elas. Quando a estirpe persistente Sau 469 foi contrastada com as não persistentes nenhum spot exclusivo foi detectado, porém algumas proteínas tiveram abundância diferencial. Posteriormente os spots serão excisados do gel, tripsinizados e identificados por espectrometria de massas, utilizando o MALDI TOF-TOF. |