Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 5678
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Veterinária |
| Bolsa | PROBIC/FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Primeiro autor | Livia Mendes Pereira Fernandes |
| Orientador | ABELARDO SILVA JUNIOR |
| Outros membros | Otávio Valério de Carvalho |
| Título | Construção de plasmídeos com sistema de expressão de RNA de interferência para silenciamento gênico do vírus da cinomose canina |
| Resumo | A cinomose canina é uma doença de significativo impacto econômico e de grande importância para a saúde animal, tendo como agente etiológico o canine distemper virus (CDV), um morbillivirus RNA fita simples, senso negativo, envelopado, membro da família Paramyxoviridae. Apesar da existência de vacinas que funcionam prevenindo a infecção há mais de cinco décadas, tal enfermidade ainda não apresenta um tratamento antiviral específico, o que resulta em elevada incidência e mortalidade, sendo inferior apenas a raiva. O caráter de gravidade da doença intensifica a demanda por recursos terapêuticos no controle dos animais infectados. Procurando por novas estratégias que possam reduzir a replicação viral do CDV, o silenciamento gênico por RNA de interferência demonstrou resultados promissores contra replicação de diferentes vírus de importância veterinária, como o vírus da raiva e poxvírus caprino. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a inibição replicativa do CDV in vitro através do tratamento com construção plasmidial contendo uma sequência codificadora para shRNAs (short hairpin RNAs) com região complementar para a nucleoproteína viral (NP). Quatro concentrações, C1 (0,25µg), C2 (0,5µg), C3 (0,75µg) e C4 (1µg), foram avaliadas em triplicata para cada tratamento em cultivo de células VerodogSLAMtag infectadas com o vírus. A quantificação de cópias do RNA da NP foi realizada por quantificação absoluta em RT-qPCR e todas as concentrações da NP resultaram em eficácia inibitória. O tratamento pENTR/U6-NP nas concentrações C4 e C3 apresentaram a maior diminuição da expressão viral, com redução de 99,25% e 98,75%, enquanto as concentrações C2 e C1 apresentaram 67,45% e 59,13% , respectivamente. O impacto do tratamento na infectividade viral foi demonstrado pela redução do da expressão proteica e a diminuição da expressão da NP apresentou comportamento dose-dependente. Outra construção plasmidial contendo uma sequência scramble foi utilizada como controle e não demonstrou inibição viral. Com base nesses resultados, a eficácia do silenciamento gênico por RNA de interferência para o CDV in vitro foi comprovada e dessa forma, representa uma ferramenta promissora para avaliação no controle da cinomose canina em futuros ensaios in vivo. |
| Palavras-chave | cinomose, vírus, RNA interferência |
| Forma de apresentação..... | Painel |