Fome e Abundância: Um Paradoxo Brasileiro?
17 a 22 de outubro de 2016
Trabalho 5644
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Exatas e Tecnológicas |
| Área temática | Microbiologia |
| Setor | Departamento de Tecnologia de Alimentos |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Caroline Peixoto Couri |
| Orientador | EDIMAR APARECIDA FILOMENO FONTES |
| Outros membros | Jéssica Fernandes Carvalhais, Maryoris Elisa Soto Lopez, REGINA CELIA SANTOS MENDONCA |
| Título | Isolamento E Purificação De Bacteriófagos Com Especificidade Sobre Listeria Monocytogenes |
| Resumo | Os bacteriófagos são vírus, hospedeiros obrigatórios de bactérias. Possuem a capacidade de infectar espécies de bactérias ou até mesmo grupos dentro de uma mesma espécie usando sua estrutura celular para se reproduzir. O objetivo desse trabalho foi isolar bacteriófagos específicos para Listeria monocytogenes ATCC 15313 a partir da coleta de amostras de leite cru (2), soro de leite (1), fezes de bovinos (2) e aves (2), queijo Minas Frescal (2) e intestino de frango caipira (1), totalizando 10 amostras analisadas. Para isso, dez gramas das amostras foram diluídas 1:1 em tampão SM (Tris-HCl, NaCl, MgSO4.7H2O e gelatina) acrescentando 0,3 g de TSB (Triptona de Soja). Foram mantidas sob agitação 150 rpm a 17 °C por 24 horas para permitir a eluição do bacteriófago para o tampão. Após este período, foram adicionados 2 mL de NaCl 5 mol L-1 em 10 mL da suspensão, e mantido sob refrigeração a 4 ºC por uma hora. A solução foi submetida à centrifugação (12.000 x g por 15 minutos a 4 °C) e a fase aquosa foi armazenada por 24 horas sob refrigeração (4 ºC) após a adição de 10 % de PEG (Polietilenoglicol). Em seguida, foi novamente centrifugada a 11.000 x g (20 minutos por 4 °C). O sobrenadante foi descartado e o pellet foi ressuspendido em 10 mL de tampão SM. Após uma hora em temperatura ambiente, adicionou-se 10 % de clorofórmio (v/v) e a solução foi novamente centrifugada (5.000 rpm por 15 minutos a 4 °C). O sobrenadante foi recuperado para pesquisa da presença dos bacteriófagos. Para isto foram realizadas microgotas de 10 μL da suspensão teste de bacteriófagos sobre uma placa contendo Agar base TSA e as culturas de Listeria monocytogenes utilizadas. Incubou-se a 37 °C por 24 horas. Das 10 amostras coletadas foi possível isolar bacteriófagos para Listeria monocytogenes ATCC 15313 em 1 amostra de intestino de frango caipira, que apresentou formação de um halo transparente na região da microgota, característico da infecção e da lise bacteriana, com rompimento das membranas e saída do conteúdo celular. A partir dos bacteriófagos isolados foi avaliada sua especificidade sobre as culturas Salmonella enterica ATCC 13076, Salmonella enterica ATC 19430, Salmonella enterica ATCC 14028, Escherichia coli ATCC 11229, Escherichia coli ATCC 23229 e Listeria monocytogenes ATCC 15313. Os bacteriófagos isolados para Listeria monocytogenes apresentaram atividade lítica contra as estirpes testadas de E. coli e contra S. typhi e S. typhimurium. Conclui-se que é possível isolar bacteriófagos que podem apresentar especificidade para Listeria monocytogenes em ambientes onde é possível encontrar estas bactérias. |
| Palavras-chave | isolamento, bacteriófagos, Listeria monocytogenes |
| Forma de apresentação..... | Painel |