Ciência, saúde e esporte: conhecimento e acessibilidade
21 a 26 de outubro de 2013
Trabalho 956
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBITI/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Amanda Martins da Cruz Souza |
| Orientador | MARCIA ROGERIA DE ALMEIDA LAMEGO |
| Outros membros | ABELARDO SILVA JUNIOR, JULIANA LOPES RANGEL FIETTO, Luís Carlos Crocco Afonso, Thiago Souza Onofre |
| Título | Padronização da detecção do Vírus de RNA de Leishmania (LRV) pelo método imunoenzimático (ELISA) |
| Resumo | Desde 1960 tem sido estudado um crescente número de vírus em parasitas, porém somente em 1988 o Vírus de RNA de Leishmania (LRV) foi descoberto em Leishmania guyanensis. O LRV pertence à família Totiviridae, que abrange uma gama de mais de 25 espécies de vírus caracterizados por sua simetria icosaédrica, com diâmetro variando entre 30 e 40 nm, e apresentam infecção persistente. O material genético do LRV é composto de um único segmento de dsRNA que contém aproximadamente 5284 nucleotídeos, apresentando quatro ORFs. O vírus possui um baixo número de cópias no interior da célula hospedeira, graças a diversos processos regulatórios sofridos durante a replicação. As novas partículas virais contém apenas ssRNA que podem ser convertidas a dsRNA na presença de nucleosídeos fosfatos. Sabe-se que a presença do LRV nas células de Leishmania agrava a infecção causada nas leishmanioses. Através de uma metodologia eficiente será possível detectar a presença do LRV em estágios iniciais da infecção. Para o desenvolvimento deste projeto, diferentes isolados de Leishmania foram cultivados e o RNA total presente nas células de Leishmania foi extraído. A partir do RNA extraído foi feita a síntese do cDNA, utilizado para a amplificação por PCR do gene do capsídeo viral do LRV. O gene amplificado e purificado será clonado em vetor plasmidial de expressão, pET-16b ou pET-28a, e inserido em Escherichia coli previamente sensibilizada para indução da proteína heteróloga do capsídeo. A purificação da proteína heteróloga será feita utilizando FPLC com a coluna HIS TRAP FF CRUDE. Após a obtenção da proteína purificada, serão montadas microplacas de 96 poços para a realização de Ensaio Imunoenzimático (ELISA) de captura, que usa anticorpos específicos para detectar antígenos e anticorpos. A partir desta metodologia, espera-se que possa ser desenvolvido um kit que poderá servir para identificar cepas de Leishmania mais virulentas e infectivas, devido à presença do LRV, o que poderá facilitar a escolha do tratamento adequado para a infecção. |
| Palavras-chave | ELISA de captura, Leishmania, Vírus de RNA de Leishmania (LRV). |
| Forma de apresentação..... | Painel |