Ciência, saúde e esporte: conhecimento e acessibilidade
21 a 26 de outubro de 2013
Trabalho 755
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Gabriel Cabral Barros |
| Orientador | SEBASTIAO TAVARES DE REZENDE |
| Outros membros | Rosilene Souza Rodrigues |
| Título | Otimização da produção e caracterização de celulases para aplicação na sacarificação de biomassas lignocelulósicas |
| Resumo | As endoglicanases, assim como as demais celulases, possuem importantes aplicabilidades industriais, tanto no setor energético quanto nas indústrias têxteis e alimentícias. Dessa maneira, é de grande interesse a busca por novas fontes de enzimas que sejam altamente termoestáveis e específicas para seus substratos, além de serem ativas em diferentes faixas de pH’s e temperaturas. O objetivo deste trabalho foi purificar uma endoglicanase produzida pelo fungo de podridão branca Pycnoporus sanguineus PF-2 crescido em 10 % (p/v) de forrageira Panicum maximum como fonte de carbono e meio mineral previamente otimizado. Testes de precipitação diferencial de proteínas e de interação com resinas iônicas, frequentemente empregadas em métodos cromatográficos, foram realizados com a finalidade de aumentar a eficiência da purificação. Através do uso de uma precipitação diferencial com sulfato de amônio e cromatografias de interação hidrofóbica, exclusão molecular e de troca iônica, várias isoformas de endoglicanases foram obtidas, as quais se mostraram com características distintas, como hidrofobicidade e carga líquida residual. Após a aplicação da amostra em uma coluna hidrofóbica, obtiveram-se dois pools F1 e F2, sendo apenas o segundo concentrado e submetido à exclusão molecular, a qual resultou na formação de dois novos pools (G1 e G2). O pool G1, que apresentou um fator de purificação de 4,61 e atividade específica de 20,6 U. mg-1, mostrou-se praticamente puro, o que pode ser verificado pelo gel de SDS-PAGE. Já a fração mais ativa (G2), apesar de ter apresentado um fator de purificação (6,77) e uma atividade específica (30,25 U. mg-1) maior que G1, ainda necessitou passar por outra etapa de purificação. De forma geral, obtiveram-se baixos rendimentos durante as etapas de purificação, o que sugeriu que estas enzimas atuam sinergisticamente em complexos de celulases. Por fim, após a última etapa (DEAE-Sepharose), três pools (I1, I2, e I3) foram formados, ou seja, três isoformas de endoglicanases, os quais possuíam um alto grau de pureza, visto que não foi possível quantificar proteínas totais nestas amostras. Contudo, o acompanhamento das etapas de purificação por eletroforese em gel SDS-PAGE revelou duas bandas de proteínas em I2, tendo massas moleculares de aproximadamente 25 e 40 kDa. Assim, após a aplicação de todas as etapas de purificação sobre o extrato bruto produzido pelo fungo Pycnoporus sanguineus PF-2, conseguiu-se isolar ao menos quatro isoformas diferentes de endoglicanases. Entretanto, estudos adicionais com espectrometria de massa devem ser realizados para confirmar a identidade destas enzimas. |
| Palavras-chave | Celulases, endoglicanases, purificação |
| Forma de apresentação..... | Painel |