Ciência, saúde e esporte: conhecimento e acessibilidade
21 a 26 de outubro de 2013
Trabalho 236
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biologia, produção e manejo animal |
| Setor | Departamento de Veterinária |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Primeiro autor | Layane Queiroz Magalhães |
| Orientador | JACKSON VICTOR DE ARAUJO |
| Outros membros | Fabio Ribeiro Braga, Filippe Elias de Freitas Soares, Juliana Milani Araujo, Lorendane Millena de Carvalho |
| Título | Apresentação de uma nova serinoprotease produzida pelo fungo nematófago Duddingtonia flagrans (AC001) e seu emprego no controle biológico de larvas de ciatostomíneos |
| Resumo | Fungos nematófagos é um grupo de microorganismos antagonistas que podem suprimir as populações de nematóides parasitas presentes no ambiente. A patogênese causada por estes fungos é um processo complexo que inclui a aderência, penetração e digestão dos nematóides. O processo de penetração acontece após 1 hora e está associado à presença de corpos densos ricos em enzimas, que atuam como peroxissomos e são encontrados apenas em armadilhas. A cutícula dos nematoides parasitos é uma estrutura complexa que representa uma significante barreira contra a penetração e infecção por antagonistas naturais destes organismos presentes no ambiente, no entanto, a segunda cutícula destes animais parece não protegê-los da predação pelos fungos, uma vez que são menos habilidosos em destruir L3 sem cutícula externa. Assim, para penetrar a cutícula de seus hospedeiros, tanto os fungos predadores quanto os entomopatogênicos são dependentes de enzimas hidrolíticas tais como as colagenases, quitinases e proteases. O objetivo do presente trabalho foi apresentar uma nova serinoprotease produzida pelo fungo nematófago Duddingtonia flagrans (AC001) avaliando a possibilidade do seu emprego no controle biológico de larvas infectantes (L3) de ciatostomíneos. O fungo D. flagrans (AC001) foi crescido em meio líquido contendo glicose, caseína, K2HPO4, MgSO4; ZnSO4; FeSO4 e CuSO4. O sobrenadante foi coletado, filtrado e aplicado em uma coluna de troca iônica DEAE-Sepharose. As frações com alta atividade de protease foram reunidas em um pool e aplicadas em uma coluna de troca iônica CM- Sepharose. A eluição das proteases foi acompanhada pelo ensaio enzimático e teor de proteína. As etapas de purificação foram acompanhadas por eletroforese (SDS-PAGE). A atividade da serinoprotease foi determinada em diferentes valores de pHs e temperaturas. Posteriormente, avaliou-se o efeito de íons metálicos e do inibidor fluoreto de fenilmetilsulfonila (PMSF) sobre a atividade da serinoprotease. A seguir, testou-se a atividade da serinoprotease de AC001 avaliando a real possibilidade do seu emprego no controle biológico de nematóides. Os resultados apresentaram uma nova serinoprotease purificada, denominada como Df1, com massa molecular aproximada de 38 kDa e aparente homogeneidade no SDS-PAGE. Além disso, foi demonstrado ainda que, o maior valor de atividade da serinoprotease (120,8 U/m) foi obtido no pH 8,0 e na temperatura de 60º C. O efeito de diferentes íons metálicos na atividade proteolítica demonstraram que o CuSO4, o ZnSO4, e o PMSF inibiram fortemente sua atividade proteolítica. O Ca+2 e o EDTA causaram o aumento da atividade da serinoprotease. Houve diferença (p<0,01) entre o número de L3 dos tubos Eppendorf do grupo tratado com a Df1 em relação ao grupo controle, apresentando um percentual de redução das L3 de 58,1%. Os resultados apresentam uma nova serinoprotease Df1 produzida pelo fungo D. flagrans (AC001) que foi eficiente na destruição in vitro de L3 de ciatostomíneos. |
| Palavras-chave | Fungos nematófagos, Duddingtonia flagrans, controle biológico |
| Forma de apresentação..... | Oral |