Resumo |
Bactérias endofíticas, especialmente as actinobactérias, podem representar uma fonte promissora de compostos bioativos para o controle de fitopatógenos. No entanto, há poucas informações na literatura sobre as actinobactérias endofíticas do feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris) e as suas características genéticas. Dessa forma, os objetivos deste trabalho consistiram em: (i) avaliar a atividade antimicrobiana de extratos de culturas de actinobactérias endofíticas das folhas do feijoeiro comum contra bactérias fitopatogênicas (Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli e Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens) dessa leguminosa, (ii) analisar a variabilidade genética dos isolados endofíticos por meio dos marcadores moleculares BOX-PCR e ERIC-PCR, e (iii) avaliar o perfil genômico de Microbacterium testaceum, a espécie predominante entre as actinobactérias deste estudo, por eletroforese em campo pulsado (PFGE). Foram analisados quarenta isolados obtidos das cultivares Talismã, Ouro Negro e Vermelhinho. Os extratos das culturas com maior atividade antimicrobiana foram submetidos a tratamentos com enzimas (pronase E, proteinase K, tripsina, DNase I e RNase), solventes orgânicos (metanol, etanol, acetona e tolueno), diferentes temperaturas (42, 65, 100 e 121°C) e diferentes valores de pH (3,0-9,5). Os perfis de bandas obtidos para os marcadores moleculares foram avaliados utilizando o software Bionumerics® (versão 6.0) e a matriz de similaridade foi construída a partir do coeficiente de Jaccard, sendo o agrupamento realizado com o algoritmo UPGMA. Para comparar os perfis de macro-restrição obtidos por PFGE, foi utilizado o coeficiente de similaridade de Dice com o mesmo algoritmo e o mesmo software. Os resultados mostraram que M. testaceum foi a maior produtora de antimicrobianos e indicaram a natureza proteica termoestável da substância antimicrobiana. Além disso, foi encontrada uma ampla variabilidade nos isolados, que foram agrupados em 15 e 18 unidades taxonômicas operacionais (OTUs), respectivamente, para o BOX-PCR e o ERIC-PCR, podendo ser discernidas determinadas OTUs de acordo com a cultivar de origem dos isolados. Perfis genômicos específicos para diferentes isolados de M. testaceum foram obtidos por PFGE com fragmentos de DNA produzidos por tratamento com a enzima XbaI. Esses perfis permitiram identificar 13 grupos dessa espécie no feijoeiro e mostraram que os isolados provenientes das cultivares Vermelhinho e Ouro Negro foram mais similares entre si. O estudo de actinobactérias endofíticas pode fornecer possibilidades para o desenvolvimento de produtos para o controle de patógenos do feijoeiro e a determinação da extensão da variabilidade existente entre elas torna-se importante para estudos genéticos futuros, incluindo prospecção de genes e melhoramento genético, que poderão auxiliar na exploração das suas potencialidades. |