Ciência, saúde e esporte: conhecimento e acessibilidade
21 a 26 de outubro de 2013
Trabalho 1509
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | FAPEMIG |
| Primeiro autor | Luan Prados Calegari |
| Orientador | SERGIO OLIVEIRA DE PAULA |
| Outros membros | Carine Ribeiro Pessoa, LEANDRO LICURSI DE OLIVEIRA |
| Título | Construção de uma vacina de DNA recombinante tetravalente contra a dengue |
| Resumo | As infecções causadas pelo vírus da dengue constituem a principal arbovirose em nível mundial e são de grande importância para o nosso país, sendo o vírus representado por quatro sorotipos diferentes DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4. Atualmente, o controle da doença se baseia na tentativa de eliminar os mosquitos do gênero Aedes que são transmissores do vírus. Outras pesquisas têm tentado desenvolver uma vacina, porém sem o sucesso desejado até o momento. Isso é devido ao fato que anticorpos produzidos em uma infecção primária, podem agravar o quadro da doença em uma infecção secundária de um sorotipo heterólogo, fenômeno conhecido como Aumento da Infecção Mediada por Anticorpos (ADE, na sigla em inglês). Por isso, possíveis vacinas para dengue devem ser tetravalentes para evitar que ocorra tal fenômeno. Este projeto teve como objetivo o desenvolvimento de uma vacina de DNA recombinante tetravalente contra a dengue, a qual é baseada na expressão de genes que codificam para o domínio III da proteína do envelope viral (proteína E), com o intuito de desenvolver uma resposta imune adequada para os quatro sorotipos do vírus. Para a construção do candidato vacinal foi feita a extração do RNA total dos quatro sorotipos do vírus e, posteriormente, a confecção da fita de DNA complementar ao RNA (cDNA). Depois de amplificados por reações de PCR utilizando primers específicos para o gene do domínio III de cada um dos quatro sorotipos, os amplicons gerados foram inseridos no vetor de clonagem pTZ57R/T. Posteriormente, os vetores de clonagem contendo o genes de interesse foram digeridos com enzimas de restrição e os fragmentos obtidos foram subclonados no vetor de expressão pVAX1. Tal processo foi feito de forma sequencial, na qual cada gene foi inserido separadamente no vetor seguindo a ordem dos sorotipos DENV-1 ao DENV-4. Após esse processo sucessivo de subclonagens no vetor de expressão, foi obtido um plasmídeo contendo os genes do domínio III da proteína E de cada um dos sorotipos do vírus, o qual constitui o nosso candidato vacinal contra a dengue. A construção correta do mesmo foi confirmada por PCR, ensaios de restrição e sequenciamento. Além disso, o plasmídeo foi avaliado quanto à expressão da proteína de interesse em cultura de células de mamífero, por meio de SDS-PAGE, Western Blot e ELISA. Agora esse candidato vacinal será testado em experimentos de imunização de camundongos, para avaliar sua capacidade de gerar uma resposta imune adequada. |
| Palavras-chave | Vacina de DNA, tetravalente, domínio III |
| Forma de apresentação..... | Oral |