Ciência, saúde e esporte: conhecimento e acessibilidade
21 a 26 de outubro de 2013
Trabalho 1084
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Nancy da Rocha Torres |
| Orientador | JULIANA LOPES RANGEL FIETTO |
| Outros membros | ABELARDO SILVA JUNIOR, GUSTAVO COSTA BRESSAN, MARCIA ROGERIA DE ALMEIDA LAMEGO, Yaro Luciolo dos Santos |
| Título | Avaliação de um protótipo vacinal para leishmaniose canina utilizando a proteína NTPDase 2 de Leishmania infantum chagasi. |
| Resumo | As leishmanioses são doenças negligenciadas de caráter zoonótico, causadas por protozoários do gênero Leishmania. Assim, como todas as leishmanioses são causadas por espécies de leishmania filogeneticamente relacionadas, o desenvolvimento de uma vacina polivalente útil tanto na profilaxia quanto no tratamento, constitui-se uma promissora ferramenta para o controle da doença canina e humana. Dessa forma, novos alvos relacionados à infectividade e virulência do parasito têm potencial como candidatos vacinais, como a NTPDase 2 de Leishmania infantum chagasi, proteína de superfície celular e caracterizada como facilitadora da infecção e molécula de virulência. Esse trabalho tem como objetivo a obtenção da proteína recombinante, para ser utilizada em testes de imunogenicidade e potencial vacinal. A construção pET21b-NTPDase 2 foi utilizada para transformar células de Escherichia coli BL21(DE3)RIL para expressão da proteína recombinante. A indução foi feita em 500 mL de meio LB e as células cresceram até atingir a DO em 600nm de 0,6. Para a indução da expressão, 0,2 mM de isopropyl-b-D-thiogalactopyranoside (IPTG) foi adicionado e a indução realizada por 1 h, a 37ºC sob agitação de 180 rpm. Os pellets correspondentes a 200 mL de cultura foram ressuspendidos em 4 mL de tampão de lise (Tris 50 mM pH 8, NaCl 300 mM, Imidazol 10 mM) acrescido dos inibidores de protease (pepstatin A 1 µg/mL, aprotinin 2 µg/mL, leupeptins 2 µg/mL) e 100 µL de lisozima 50 mg/mL. A suspenção foi homogeneizada, sonicada e centrifugada (3.500 g por 20 min a 4 °C). O pellet foi ressuspendido em 20 mL de tampão de lavagem (Tris 50 mM pH 8, NaCl 500 mM, β-mercaptoetanol 10 mM, uréia 2 M), sonicado e centrifugado, sendo esse processo realizado por três vezes. Após a última lavagem o pellet foi ressuspendido em 10 mL de tampão de solubilização (Tris 100 mM pH 8, NaCl 500 mM, Uréia 8 M), incubado por 20 min a 55°C, sonicado, centrifugado e o sobrenadante filtrado (0,45 µm) e purificado utilizando o sistema FPLC-AKTA (Fast Protein Liquid Chromatography). O produto final apresentou um alto grau de enriquecimento da proteína de interesse e concentrações de uréia dentro dos padrões requeridos para os testes vacinais. A proteína recombinante NTPDase 2 foi utilizada na formulação de dois protótipos vacinais (Vac2 e Vac1Vac2) em dois experimentos independentes em camundongos Balc C e será utilizada na estimulação da cultura de células extraídas do baço (estímulo antígeno específico) dos animais vacinados com o objetivo de se verificar qual perfil imunológico (Th1 ou Th2) é estimulado pelas formulações e se este perfil é indicativo de proteção frente à infecção por L. infantum chagasi. |
| Palavras-chave | Leishmaniose visceral, NTPDase2, vacina |
| Forma de apresentação..... | Painel |