Das Montanhas de Minas ao Oceano: Os Caminhos da Ciência para um Futuro Sustentável
20 a 25 de outubro de 2025
Trabalho 22177
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Dimensões Sociais: ODS3 |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Júlia Costa Nacif Santos |
| Orientador | TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Outros membros | Ananda Pereira Aguilar, LUCAS VILAS BOAS MAGALHAES |
| Título | Desenvolvimento de Método de Diagnóstico Molecular para Detecção de Mutação Associada à Esclerose Lateral Amiotrófica Tipo 8 em População Brasileira |
| Resumo | Introdução: Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA) engloba um conjunto heterogêneo de doenças neurodegenerativas fatais que evoluem com perda progressiva de mobilidade, fala, deglutição e respiração. Cerca de 10% dos casos correspondem a formas monogênicas da doença, dentre essas a variante relacionada à mutação P56S do gene VAPB, que leva ao desenvolvimento da forma familiar de ELA mais prevalente no Brasil, especialmente na Zona da Mata Mineira: ELA 8. As particularidades clínicas e epidemiológicas destes pacientes reforçam a necessidade de estudos nacionais com o intuito de fortalecer o entendimento dos mecanismos fisiopatológicos, aprimorar métodos diagnósticos e desenvolver terapias efetivas para a ELA 8. Objetivos: Este estudo teve como objetivo desenvolver um método diagnóstico molecular para identificar mutação associada ao gene VAPB para diagnóstico de ELA 8 em alelos frequentes na população brasileira. Metodologia: Para identificação das mutações, sequência dos genes codificadores de VAPB foram recuperados do NCBI e primers específicos para a mutação P56S foram desenhados para serem utilizados em PCR convencional utilizando DNA e cDNA de células da mucosa bucal de voluntários. As coletas das amostras, processamento e extração do DNA e RNA, bem como a conversão para cDNA foram previamente realizados em um procedimento aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa nº 1556550, sob número de parecer 4.344.007. Os primers para amplificação do gene - VAPB1 e VAPB2 - foram selecionados e tiveram suas temperaturas ideais de anelamento padronizadas. Em seguida, os fragmentos amplificados em cada PCR foram confirmados por Sequenciamento de Sanger através da inserção do produto de PCR em vetor pGEM-T-easy. Resultados: Para o VAPB1, a PCR com gradiente de temperatura evidenciou a presença do positividade de reação por eletroforese tanto em amostras de DNA quanto em cDNA nas temperaturas de anelamento 50ºC, 52ºC e 54ºC, neste último com menos bandas inespecíficas associadas. A melhor temperatura de anelamento para o VAPB2 foi 58ºC, embora o fragmento de interesse tenha sido amplificado apenas em amostras de DNA. Nas PCR com VAPB2, além do fragmento de interesse, evidenciou-se outra banda de forte intensidade, que também foi enviada para sequenciamento para identificar o potencial de inespecificidade. Conclusão: Os primers selecionados foram capazes de identificar corretamente o gene VAPB, abrindo caminho para etapas subsequentes do trabalho que consistem em confecção de primer para identificação da sequência de VAPB mutada para padronização do método de detecção molecular de pacientes com ELA8 com mutações mais frequentes no país. |
| Palavras-chave | Esclerose Lateral Amiotrófica, VAPB, Diagnóstico Molecular |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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