| Resumo |
A soja (Glycine max) é uma das culturas mais relevantes no cenário agrícola mundial, sendo amplamente utilizada na alimentação humana e animal, em formas como grão, leite, queijos e rações. No Brasil, a soja representa uma base sólida para a economia, com destaque na liderança mundial tanto em volume de produção quanto em área plantada. Entretanto, doenças como a ferrugem asiática da soja (FAS), causada pelo fungo Phakopsora pachyrhizi (Sydow & Sydow), gera perdas à produtividade. A FAS é uma das doenças mais devastadoras que acometem a cultura da soja, capaz de causar prejuízos severos sob condições ambientais favoráveis ao patógeno, reduzindo drasticamente a qualidade das sementes e os rendimentos agrícolas. Nesse contexto, a aplicação da biotecnologia para estudar mecanismos moleculares de resistência tem se mostrado essencial. Uma abordagem estratégica é a análise das interações entre proteínas efetoras do patógeno e proteínas de resistência da soja, como as RPP1 e RPP1-like LRR (Resistance to Phakopsora pachyrhizi 1 / Leucine-Rich Repeat). Efetores são moléculas secretadas por patógenos com a função de suprimir a imunidade do hospedeiro, facilitando a infecção. Em contrapartida, as proteínas RPP1 atuam como receptores que reconhecem efetores específicos, desencadeando respostas imunes na planta. Assim, a identificação dessas interações pode revelar alvos moleculares críticos para o desenvolvimento de cultivares geneticamente mais resistentes à ferrugem asiática. Este trabalho tem como objetivo identificar interações entre proteínas efetoras de P. pachyrhizi e proteínas de defesa da soja por meio do sistema de Duplo Híbrido em Levedura (Y2H). A metodologia envolve, inicialmente, a clonagem dos genes de interesse no vetor pDEST32, seguida por transformação em bactérias competentes Escherichia coli DH5-α. A confirmação da inserção será realizada por digestão com enzimas de restrição HindIII e SacI. Posteriormente, as construções gênicas serão transformadas em células de Saccharomyces cerevisiae cepa AH109, juntamente com uma biblioteca de cDNA do fungo. O ensaio Y2H permitirá detectar interações entre os produtos gênicos expressos, sendo os clones positivos posteriormente sequenciados para identificação dos genes envolvidos. Espera-se identificar interações moleculares específicas entre proteínas efetoras de P. pachyrhizi e proteínas de resistência da soja, especialmente da família RPP1/RPP1-like LRR. Tais interações poderão elucidar mecanismos de reconhecimento do patógeno pela planta hospedeira e revelar potenciais alvos para o melhoramento genético de cultivares resistentes. Os dados obtidos poderão subsidiar estratégias biotecnológicas inovadoras para o controle da ferrugem asiática, contribuindo para a sustentabilidade da produção de soja e redução do uso de fungicidas. |