| Resumo |
Bactérias do gênero Pseudomonas são comumente associadas a deterioração de produtos lácteos e cárneos, com destaque para P. fluorescens, P. aeruginosa e P. putida. A detecção precoce dessas bactérias é essencial para garantir segurança, qualidade e para reduzir o desperdício de alimentos. Diante disso, plataformas transdutoras baseadas em polidiacetileno (PDA) vêm sendo desenvolvidas como métodos colorimétricos de detecção microbiana. Esses sistemas se destacam pela facilidade de visualização dos resultados e baixo custo, além de permitirem a integração com biomoléculas sensoras para aumento da especificidade. Nesse sentido, desenvolvemos, em parceria com a empresa Recombine Biotecnologia, um teste colorimétrico baseado em vesículas de PDA incorporadas com uma proteína fágica para detecção de Pseudomonas spp. Entretanto, o teste tem apresentado baixa sensibilidade, interferência de matrizes alimentares e especificidade moderada. Sendo assim, tornar-se essencial otimizar o sistema visando a melhoria desses parâmetros para a detecção de Pseudomonas spp. em alimentos e ambiente industrial. Para isso, neste trabalho os fatores concentração da proteína sensora [P] (0,00; 0,25 e 0,50 mg/mL) e presença/ausência de bloqueio [B] polivinilálcool (PVA) a 0,5% v/v foram avaliados de forma combinada. As vesículas foram aplicadas de maneira direta e indireta (após centrifugação) frente a suspensões de P. fluorescens 07A, P. aeruginosa ATCC 15442, Escherichia coli ATCC 29214 e Salmonella sp. A variável resposta foi a observação de transição colorimétrica (TC) das suspensões de azul para roxo/rosa/vermelho após uma hora de contato. A formulação com melhor performance foi então avaliada em matrizes alimentares - leite, queijo e salsicha contaminados. A formulação contendo 0,25 mg/mL de proteína com bloqueio foi a única a apresentar resultado positivo para P. fluorescens e P. aeruginosa com sensibilidade de 10^8 UFC/mL, o que representa uma redução de 1 Log em relação à versão anterior do teste. Por outro lado, na aplicação direta das suspensões, houve TC na presença de E. coli e Salmonella sp. A especificidade foi maior quando utilizadas as amostras centrifugadas, não sendo observada TC para E. coli. Os componentes das matrizes de leite, queijo e salsicha levaram à precipitação das vesículas e TC mesmo naquelas não contaminadas. Conclui-se que este sistema de detecção é uma opção tecnicamente viável para detecção de biofilmes no ambiente industrial, principalmente devido ao elevado limite de detecção, mas não seria recomendado para análises diretas em matrizes alimentícias. Para isso, novas etapas de otimização serão necessárias visando mitigar a agregação vesicular em sistemas complexos. |