| Resumo |
Células estromais mesenquimais (MSCs) possuem alto potencial como tratamento avançado para regeneração óssea, devido à sua capacidade de diferenciação e ação parácrina. Vesículas extracelulares (EVs) são nanopartículas liberadas pelas células, responsáveis pela comunicação celular, e compõem o secretoma. São importantes mediadores dos efeitos tróficos das MSCs terapêuticas com as células do hospedeiro, com a vantagem de serem uma terapia livre de células. O papel da modulação da expressão gênica das EVs está ligado à presença de diversos microRNAs, descritos como marcadores e adjuvantes terapêuticos da osteogênese. Os microRNAs são pequenas moléculas de RNA não codificantes, compostas de 19 a 25 nucleotídeos, e que atuam em diversas vias de sinalização endógenas, regulando a expressão gênica nos organismos multicelulares. Considerando que as MSCs são influenciadas pelo microambiente, o pré-condicionamento osteogênico in vitro visa induzir a produção de EVs com melhor ação terapêutica na regeneração óssea, com potencial melhora na expressão gênica de microRNAs. Assim, buscou-se avaliar a presença dos microRNAs 21 e 26-a, relatados como tendo participação na formação óssea, em EVs de MSCs com e sem pré-condicionamento osteogênico. As células foram isoladas de cordão umbilical de fêmeas caninas após cesariana terapêutica e cultivadas até ponto ideal para extração de EVs. Foram divididas em grupo controle, “CRTL”, sem pré-condicionamento, e “OSTEO”, com indução osteogênica. As EVs foram coletadas e realizada a análise de microRNAs por RT-qPCR. Após o tratamento dos dados obtidos, a expressão gênica dos microRNAs de interesse no grupo OSTEO em relação ao CTRL foi avaliada. Detectou-se a presença de microRNA-21 e microRNA26-a em ambos os grupos, mas com maior expressão no OSTEO. O microRNA-26a foi observado oito vezes mais expresso nas EVs OSTEO do que nas CTRL, e microRNA-21, cinco vezes mais expresso. Os efeitos reguladores dos microRNAs sobre as principais vias de sinalização da osteogênese e angiogênese têm sido extensamente estudados nos últimos anos para tratamento de falhas na regeneração de defeitos ósseos. O microRNA-21 tem papel importante no remodelamento e na homeostase óssea por atuar na comunicação entre osteoblastos e osteoclastos. A ação do microRNA-26a está relacionado à angiogênese e osteogênese, sendo ambos já associados ao reparo de defeitos ósseos. Assim, foi concluído que o pré-condicionamento promoveu maior expressão dos dois microRNAs referidos, evidenciando a influência do microambiente de cultivo no conteúdo das EVs e, possivelmente, na promoção da regeneração óssea, como observado em estudos in vitro de migração e diferenciação celulares. |