Das Montanhas de Minas ao Oceano: Os Caminhos da Ciência para um Futuro Sustentável
20 a 25 de outubro de 2025
Trabalho 22010
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Dimensões Sociais: ODS2 |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBITI/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Cíntia Soares Custódio |
| Orientador | TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Outros membros | Ananda Pereira Aguilar, Pedro José Cesário Campos |
| Título | Expressão e purificação de proteínas cry para controle de Spodoptera frugiperda em lavouras. |
| Resumo | Spodoptera frugiperda, também conhecida como lagarta-do-cartucho, é uma praga desfolhadora, que possui a capacidade de perfurar as vagens de oleaginosas, acarretando grande perda da produtividade nas lavouras de soja e milho. A principal forma de controle dessa praga hoje é por meio de agroquímicos, que podem causar resistência e ser prejudicial à fauna e flora local. Uma alternativa de controle é o uso de bioinseticidas, como proteínas cry, que são capazes de provocar poros no intestino da lagarta, desencadeando um colapso osmótico, que leva o inseto à morte. O objetivo deste trabalho foi reconhecer possíveis proteínas cry em isolados de Bacillus thuringiensis e otimizar sua expressão e purificação para teste de mortalidade em S. frugiperda. Para isso, inicialmente foi realizado um teste bruto para verificar que os isolados (obtidos em parceria com a Universidade Federal do Tocantins), possuíam a capacidade de provocar morte na lagarta-do-cartucho. Em seguida foi realizada uma PCR convencional com primers de crys convencionais descritas na literatura, para verificar se elas estavam presentes. Posteriormente o DNA genômico, da cepa escolhida para trabalho, foi extraído e sequenciado, de forma que a montagem foi realizada por um aluno do mesmo grupo de pesquisa. Em sequência, foi realizado um BLAST com o banco de dados NCBI para verificar o percentual de identidade com proteínas cry convencionais, seguido de um estudo das funções das proteínas mais promissoras. À partir disso, foram escolhidas 3 sequências, das quais foram desenhados primers de expressão. Assim, o gDNA foi novamente extraído e o produto de PCR foi ligado em vetor pGEM T-Easy e transformado em Escherichia coli DH5α, para multiplicação do plasmídeo. Para confirmar a transformação, foi realizado uma extração do DNA plasmidial e uma PCR com os primers desenhados e sequenciamento pelo método de Sanger. Para os próximos passos, será realizada a clivagem do vetor com enzimas NheI e XhoI seguida de clonagem em vetor pET 28a e transformação em E. coli BL21 para expressão das proteínas de interesse. Também será feita a purificação pelo sistema de cromatografia AKTA Start Protein Purification System e teste de mortalidade em S. frugiperda com as proteínas purificadas. Como resultado, o teste de mortalidade bruto mostrou que uma cepa provocou maior mortalidade em relação ao grupo controle e aos outros B. thuringiensis. Além disso, o pBLAST com o banco de dados mostrou uma baixa identidade entre proteínas cry convencionais e o gDNA sequenciado, o que foi confirmado com a PCR de primers descritos na literatura, já que nenhum deles apresentou banda na altura correta em gel de agarose. Dessa forma, é possível concluir que o B. thuringiensis obtido possui capacidade de provocar mortalidade em lagarta-do-cartucho, mas não possui proteínas cry convencionais, o que possibilita o estudo de sequências de proteínas promissoras, capazes de causar mortalidade em S. frugiperda. |
| Palavras-chave | Expressão, proteínas cry, Spodoptera frugiperda |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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