Das Montanhas de Minas ao Oceano: Os Caminhos da Ciência para um Futuro Sustentável
20 a 25 de outubro de 2025
Trabalho 21911
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Dimensões Sociais: ODS2 |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Ian Lucas Batista Santos |
| Orientador | MARIA GORETI DE ALMEIDA OLIVEIRA |
| Outros membros | Geisiane Aparecida Mariano, Halina Schultz, HUMBERTO JOSUE DE OLIVEIRA RAMOS, Rafael Júnior de Andrade |
| Título | Avaliação da inibição por peptídeos sintéticos na atividade de proteases tripsina-like em Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) |
| Resumo | A Spodoptera frugiperda J. E. Smith, 1797 (Lepidoptera: Noctuidae), popularmente conhecida como lagarta-do-cartucho do milho, é uma praga agrícola conhecida por seu comportamento de migração, sua alta capacidade reprodutiva e resistência à inseticidas químicos. Há uma busca ao longo dos anos por moléculas capazes de inibir a atividade de enzimas proteolíticas envolvidas na digestão de insetos-pragas. Os peptídeos GORE1 e GORE2 foram avaliados com o objetivo de determinar sua capacidade de inibição na atividade das enzimas tripsina-like do intestino médio de S. frugiperda in vitro, obtendo sua constante e modelo de inibição. Os insetos foram criados com dieta artificial e condições ambientais controladas: 60 ± 10% de umidade, 25 ±1º C e fotoperíodo de 14h de luz e 10h de escuro. As larvas, ao atingirem o quinto ínstar, foram dissecadas e seus intestinos macerados em nitrogênio líquido. Os intestinos foram adicionados a uma solução de HCl 10-3 M, na proporção de 5 intestinos para cada mL de solução. As amostras foram centrifugadas a 10.000 g por 30 min a 4º C. O sobrenadante (extrato enzimático) foi retirado e armazenado a -80° C para análise posterior. O processo de purificação parcial foi realizado em uma coluna de p-aminobenzamidina. A atividade das enzimas tripsina-like foi avaliada utilizando o substrato cromatográfico DL-BApNA, numa faixa de concentração de 1,25 a 20,0 mM e em meio reacional contendo Tris-HCl 0,1 mol L-1. As leituras foram realizadas em espectrofotômetro por 150 segundos a 410 nm. Gráficos de Michaelis-Menten, Lineweaver-Burke e Dixon foram construídos para identificar o tipo de inibição e calcular o Ki, com auxílio do software GraphPad Prism. A concentração dos peptídeos GORE1 e GORE2 variou de 0,04 a 1,28 mM. Também foram utilizados os inibidores SKTI (inibidor natural) e a Benzamidina (inibidor sintético) como controles positivos. As concentrações avaliadas foram na faixa de 0,1 a 1,0 nM e 10 a 50 µM para SKTI a Benzamidina, respectivamente. Reações sem adição de inibidor foram utilizadas como controle. Todos os ensaios foram realizados em triplicata. Os valores de Ki obtidos para os inibidores, foram 1,41 mM, 0,49mM, 4,75 nM e 16,70 µM, para GORE1, GORE2, SKTI e benzamidina, respectivamente. Os peptídeos apresentaram inibição competitiva nas faixas de concentrações avaliadas. Dessa forma, há evidências que os peptídeos GORE1 e GORE2 possuem capacidade inibitória e ensaios in vivo se fazem necessários para avaliar os efeitos da inibição enzimática no ciclo biológico e sobrevivência dessa praga. |
| Palavras-chave | Milho, manejo de pragas, cinética enzimática |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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