| Resumo |
A qualidade química e sensorial do café está associada às exigências nutricionais da planta, incluindo a disponibilidade de nitrogênio, fósforo e potássio do solo. Após a colheita, estes minerais são removidos, diminuindo sua biodisponibilidade no solo e limitando o sucesso dos ciclos de plantio. Atualmente, são utilizados cerca de 2 toneladas de fertilizantes químicos em cultivares de café. Todavia, estes fertilizantes acarretam no aumento da acidez do solo e diminuem a diversidade de microrganismos benéficos. A redução da diversidade microbiana afeta negativamente a fertilidade do solo. Nesse cenário, técnicas de fertilização orgânica surgem como uma alternativa sustentável para o contínuo desenvolvimento da cafeicultura. Dessa forma, buscou-se caracterizar a composição da comunidade microbiana de um composto a base de cama de aviário com casca de café durante 3 períodos de tempo diferentes através das técnicas de extração de DNA, PCR e sequenciamento. Sendo a primeira parte do trabalho a avaliação da qualidade do DNA obtido. Três amostras de composto orgânico foram coletadas em pontos temporais durante o processo de compostagem. As amostras foram recolhidas aos 10,30 e 60 dias a partir do início da compostagem. O DNA dessas amostras foi extraído usando o Kit Nucleo Spin Soil. A qualidade e quantidade do DNA foram avaliadas por espectrofotometria (NanoDrop) e eletroforese em gel. Para caracterizar a comunidade microbiana, a região ITS para fungos e o gene 16S rRNA para bactérias foram amplificadas por PCR. O produto dessa reação será submetido ao sequenciamento de última geração (Illumina) para determinar a composição e diversidade. As concentrações de DNA variaram de 13,47 ng/µL a 46,02 ng/µL. Considerando que os valores de razão A260/A280 ideal são próximos a 1,8, os valores obtidos no experimento indicam uma baixa contaminação por proteínas e fenóis. A razão A260/A230 oscilou e apresentou um valor abaixo do ideal, o que pode ser justificado, pelo desafio em extrações de DNA de matrizes com valores elevados de matéria orgânica, como o composto orgânico. Além disso, a verificação da integridade do DNA por eletroforese em gel de agarose a 0,8%, confirma a presença de DNA de alto peso molecular na maioria das amostras, sendo mais visível no período de 60 dias, visualizado pela nitidez das bandas. Esta observação é crucial, pois DNA íntegro é preferível para realizar o sequenciamento de DNA, otimizando a qualidade dos dados gerados. Dentre os parâmetros avaliados observamos que tanto o DNA quando seu amplificado (PCR) estão em boa qualidade que permitirá realizar o sequenciamento das amostras que será a etapa final do projeto.
Agradecimentos: UFV, LAMIC, DMB, Fazenda Casa Nova, FAPEMIG, CNPq e CAPES |