Das Montanhas de Minas ao Oceano: Os Caminhos da Ciência para um Futuro Sustentável
20 a 25 de outubro de 2025
Trabalho 21523
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Dimensões Econômicas: ODS9 |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Isabella Ester Pires Ribeiro |
| Orientador | MARIANA MACHADO NEVES |
| Outros membros | Ana Carolina Marta Trindade, Geniana da Silva Gomes, Tayná Bolsam da Silva, Thanyanne Rafaela de Morais Ferreira |
| Título | Avaliação de protocolos para clonagem, expressão e produção de proteína do plasma seminal bovino |
| Resumo | A criopreservação de sêmen ainda representa um desafio significativo para a reprodução de diversas espécies de interesse zootécnico. Esta dificuldade está relacionada a diferenças naturais na crioresistência dos gametas masculinos, que podem responder de diferentes maneiras aos efeitos desse processo. O plasma seminal, que é um componente crucial do ejaculado, desempenha funções essenciais na fertilidade animal e pode influenciar a criotolerância do espermatozoide. Dentre seus constituintes, destacam-se as proteínas, que podem proteger a integridade de membrana da célula durante o congelamento e descongelamento. Estudos têm mostrado que algumas proteínas do plasma seminal de touros, como a Binder of Sperm Protein 5 (BSP5), são potenciais biomarcadores de alta fertilidade. Assim, o objetivo deste trabalho foi produzir, expressar e purificar a proteína recombinante BSP5 do plasma seminal de bovinos. Para isso, foi utilizado o vetor pET-28a(+) e diferentes cepas da bactéria Escherichia coli. Inicialmente, o clone recombinante da proteína-alvo foi introduzido na cepa DH5α por transformação por choque térmico, e a clonagem confirmada por PCR. Em seguida, foi realizado o teste de cepas, que incluía a BL21(DE3), SHuffle® T7 e Arctic Express, avaliadas por PCR. A cepa Arctic Express demonstrou ser a mais promissora. Foram realizadas expressões em pequena e larga escala, com identificação da proteína por eletroforese unidimensional em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e confirmação por imunodetecção por Western blotting. A concentração da proteína recombinante pós expressão foi determinada pelo método de Bradford. Posteriormente, foi realizada a purificação utilizando o sistema ÄKTA Start, por cromatografia de afinidade por metal imobilizado (IMAC). A pureza da proteína foi avaliada por eletroforese em gel de poliacrilamida, a concentração determinada pelo método Qubit, e a identidade confirmada por Western blotting. Os resultados mostraram que a expressão da proteína recombinante BSP5 em Escherichia coli, por meio do vetor plasmidial pET-28a(+), permitiu a produção de forma satisfatória, especialmente com a utilização da cepa Arctic Express. A purificação por cromatografia de afinidade resultou em quantidades expressivas da proteína. A produção bem-sucedida reforça a viabilidade da metodologia empregada, com perspectivas futuras de aplicação na criopreservação de sêmen. |
| Palavras-chave | Espermatozoides, proteína recombinante, criotolerância. |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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