| Resumo |
O uso intensivo de plásticos derivados do petróleo, especialmente no setor alimentício, tem causado impactos ambientais relevantes. Como alternativa, os bioplásticos vêm sendo estudados por serem biodegradáveis e obtidos de fontes renováveis, como microrganismos, plantas e biomoléculas. Dentre os principais biopolímeros, destacam-se o ácido polilático (PLA), os polihidroxialcanoatos (PHA) e, em especial, o polihidroxibutirato (PHB), um poliéster linear da família dos PHA amplamente aplicado na indústria. O PHB é acumulado como fonte energética em grânulos intracelulares por bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Este estudo objetivou avaliar o potencial de produção de PHB por bactérias isoladas do efluente do “Laticínio Escola – Produtos Viçosa”, vinculada à Fundação Arthur Bernardes (FUNARBE), em Viçosa, MG, Brasil. Foram analisados 11 isolados bacterianos, LIP1 a LIP11, pertencentes à coleção do Laboratório de Microbiologia Industrial e de Alimentos (LAMIND) e armazenados em caldo Luria Bertani (LB) com 20% (v/v) de glicerol a -20 °C. Todos os isolados foram ativados e reativados em caldo LB a 37 °C por 24 h. Em seguida, foi realizado o plaqueamento por esgotamento em ágar LB para certificar a pureza das culturas e obter colônias isoladas, utilizadas na coloração de Gram. Adicionalmente, a partir das culturas reativadas em caldo LB, foi realizado o plaqueamento de 10 µL de cada isolado em ágar LB em triplicata, e as placas foram incubadas a 37 ºC. Após 24 h, uma solução de 0,05% (m/v) de Sudan Black B em etanol 70% (v/v) foi espalhada sobre as colônias e mantida em repouso por 30 min. O excesso de corante foi removido por lavagens com etanol 96% (v/v), e as colônias que ficaram com a cor azul escura foram consideradas com potencial de produção de PHB, diferentemente das que permaneceram brancas ou incolores. As colônias com coloração azul escura foram espalhadas em uma lâmina de vidro, fixadas por calor, coradas com safranina por 20 s, lavadas com água destilada e observadas em microscópio até a lente objetiva de 100x. Os isolados com potencial para a produção de PHB apresentaram o citoplasma corado de rosa claro pela safranina e os grânulos de PHB corados de preto pelo Sudan Black B. Para as análises, foram utilizadas as culturas AM23-2 e LB8 como controles positivo e negativo, respectivamente. Todos os isolados foram identificados como Gram-negativos, sendo que LIP1, LIP2, LIP6, LIP7, LIP9 e LB8 apresentaram a forma de bacilos, enquanto os demais foram cocos. Apenas o controle positivo apresentou coloração indicativa de produção de PHB, enquanto os demais isolados foram negativos. Outros autores demonstraram que bactérias isoladas de ambientes poluídos têm potencial para produção de PHB. Como perspectiva, recomenda-se a avaliação de outros isolados bacterianos, bem como a otimização das condições de cultivo, como fontes de carbono e variáveis ambientais, que possam favorecer a síntese de PHB. |