Das Montanhas de Minas ao Oceano: Os Caminhos da Ciência para um Futuro Sustentável
20 a 25 de outubro de 2025
Trabalho 20860
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Dimensões Econômicas: ODS9 |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, FUNARBE |
| Primeiro autor | Jullia Maria de Souza Cruz |
| Orientador | ELIZABETH PACHECO BATISTA FONTES |
| Outros membros | PEDRO AUGUSTO BRAGA DOS REIS, Sâmera de Souza Breves |
| Título | Linhagens de Arabdopsis thaliana com WWP1 Mutada como Ferramenta Molecular para o Estudo da sua Função Antiviral |
| Resumo | A proteína “WW Domain-Containing Protein-1”, WWP1, de Arabdopsis thaliana, (AtWWP1), composta por 463 aminoácidos, possui dois domínios de triptofano (WW), responsáveis por reconhecer motivos ricos de prolina, presentes na proteína viral Nuclear Shuttle Protein (NSP). Durante a infecção viral por begomovírus, da família Geminiviridae, AtWWP1 recruta NSP-Interacting GTPase (NIG), localizada na porção citoplasmática do complexo dos poros nucleares, para o núcleo celular, formando corpos nucleares. Esta ação impede que NIG desempenhe sua função de transporte do DNA viral do núcleo para o citoplasma, através de sua ligação com NSP; portanto, WWP1 exerce atividade antiviral. A importância dos domínios WW para a formação de corpos nucleares por AtWWP1 já foi descrita, no qual ensaios por expressão transiente em Nicotiana benthamiana com AtWWP1 mutada por substituições gradativas dos resíduos conservados de triptofano por alanina (A), demonstram que a dinâmica de formação desses corpos nucleares é comprometida devido à interferência na interação com NIG, afetando a defesa antiviral. O presente trabalho visa o desenvolvimento de ferramenta molecular através de expressão estável em Arabdopsis thaliana e a caracterização bioquímica da proteína WWP1 mutada. A fim de obter melhor compreensão da dinâmica de formação dos corpos nucleares e função biológica da proteína AtWWP1 na atividade antiviral, foi utilizado linhagem de planta nocaute atwwp1-1 (Salk_073780) para complementação e linhagem selvagem ecotipo Col-0 para a superexpressão dos mutantes contendo substituição gradativa dos domínios de WW por A com a etiqueta “Green Fluorescent Protein” (GFP), pelo método de transformação genética de plantas, por mergulho floral via Agrobacterium tumenfanciens (GV3101). As sementes foram selecionadas em meio Murashige e Skoog (MS) contendo antibiótico canamicina, sendo avaliada a homozigose nas sucessivas gerações pelo teste do qui-quadrado e genotipadas por PCR convencional. Para as linhagens transformadas, o nível de expressão do gene AtWWP1 foi avaliado por RT-qPCR e a expressão da proteína GFP foi observada via microscopia confocal. Dessa forma, foram selecionadas três linhagens independentes em homozigose de cada genótipo para as substituições de 1 a 4 resíduos dos domínios de WW por A, denominadas Col/M1, Col/M2, Col/M3 e Col/M4, para as plantas superexpressando, e KO/M1, KO/M2, KO/M3 e KO/M4 para as complementadas, onde apenas uma inserção do gene foi obtida, correspondendo à segregação mendeliana de 3:1. A genotipagem das linhagens obteve um único produto de amplificação de 1500 pb, correspondente ao gene de AtWWP1. A superexpressão foi confirmada em contraste com o gene AtWWP1 de Col-0 e o restabelecimento da função foi observado em relação à nocaute atwwp1-1. Além disso, o nível de expressão de GFP confirmou a transformação. O desenvolvimento de ferramenta molecular permitiu a obtenção de linhagens independentes dos mutantes de AtWWP1. |
| Palavras-chave | AtWWP1, corpos nucleares, atividade antiviral. |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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