Das Montanhas de Minas ao Oceano: Os Caminhos da Ciência para um Futuro Sustentável
20 a 25 de outubro de 2025
Trabalho 20828
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Dimensões Sociais: ODS2 |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Laura Davin Silva |
| Orientador | PEDRO AUGUSTO BRAGA DOS REIS |
| Outros membros | ELIZABETH PACHECO BATISTA FONTES, Vivian das Gracas Sodré Floresta |
| Título | Caracterização bioquímica e molecular de AtCPSF30 |
| Resumo | O processamento do RNA mensageiro (RNAm) é fundamental para garantir sua estabilidade, exportação nuclear e tradução eficiente. Em eucariotos, a clivagem e a poliadenilação da extremidade 3’ do RNAm dependem de complexos multiproteicos, destacando-se o CPSF (Cleavage and Polyadenylation Specificity Factor), composto por seis subunidades, incluindo a proteína de 30 kDa CPSF30. Em Arabidopsis thaliana, mutantes nulos para AtCPSF30 apresentam menor fertilidade, redução na formação de raízes laterais e alteração na sensibilidade a estresses oxidativos, evidenciando seu papel central no desenvolvimento e na adaptação a diferentes estresses. Além disso, já foi demonstrado que a ausência de proteínas do complexo G leva à fosforilação diferencial de CPSF30 na presença de flg22, o que pode impactar a escolha de sítios de poliadenilação e gerar isoformas de mRNAs com diferentes respostas a estresses. Diante desse contexto, o presente trabalho tem como objetivo geral caracterizar molecularmente o gene CPSF30 e produzir plantas transgênicas superexpressando AtCPSF30 para investigar seu papel na modulação de respostas a estresses bióticos e abióticos, avançando na compreensão dos mecanismos de regulação pós-transcricional mediados por essa proteína. Para isso, o gene CPSF30 foi clonado via sistema Gateway a partir da CDS em vetor de entrada (pDONR201) e transferido para o vetor de expressão (pEarleyGate103), permitindo a fusão com GFP para análises de localização. As construções foram introduzidas em Agrobacterium tumefaciens (estirpe GV3101), utilizada tanto para agroinfiltração em Nicotiana benthamiana quanto para, futuramente, a transformação de plantas Arabidopsis col-0 (ecótipo selvagem) pelo método do mergulho do pendão floral, possibilitando a obtenção de sementes das plantas transgênicas. Posteriormente, foram realizadas análises preliminares de localização subcelular por microscopia confocal em folhas de tabaco infiltradas, utilizando a proteína nuclear WWP1-mCherry como controle e submetendo as folhas a diferentes estímulos. Os resultados indicaram expressão eficiente de CPSF30-GFP, com localização preferencial no núcleo, especialmente em regiões próximas à membrana nuclear. Adicionalmente, observou-se que, sob estresse induzido por ácido salicílico, CPSF30 formou corpos nucleares, sugerindo possível reorganização subnuclear em resposta a condições adversas. Conclui-se, assim, que o gene foi eficientemente clonado e expresso, viabilizando o estabelecimento de linhas transgênicas cujas sementes serão empregadas em estudos futuros para avaliar o papel de AtCPSF30 na resposta a diferentes estresses. Esses trabalhos poderão contribuir significativamente para elucidar sua função no metabolismo de RNA e para o desenvolvimento de estratégias biotecnológicas voltadas à criação de plantas mais tolerantes a ambientes desfavoráveis. |
| Palavras-chave | CPSF 30, RNA, Arabdopsis Thaliana |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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