Das Montanhas de Minas ao Oceano: Os Caminhos da Ciência para um Futuro Sustentável
20 a 25 de outubro de 2025
Trabalho 20567
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Dimensões Sociais: ODS3 |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | Não se Aplica |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Primeiro autor | Leonardo Ferreira Morais |
| Orientador | JULIANA LOPES RANGEL FIETTO |
| Outros membros | Amanda Laviola de Andrade, Isadora Cunha Ribeiro |
| Título | Desenvolvimento in sílico de “primers” LAMP para detecção específica de gênero Leishmania |
| Resumo | A Leishmaniose e a Doença de Chagas, doenças da família Trypanosomatidae, são enfermidades negligenciadas na América Latina, exigindo estratégias diagnósticas específicas e acessíveis. Este estudo teve como objetivo desenvolver e validar computacionalmente (in silico) um conjunto de primers para um ensaio de Amplificação Isotérmica Mediada por Loop (LAMP), capaz de detectar o DNA de Leishmania spp. com alta especificidade e sem reação cruzada com Trypanosoma cruzi. A região ITS1 do cistron ribossômico foi selecionada como alvo molecular por reunir conservação intragênero, divergência interespecífica, e presença em múltiplas cópias, favorecendo tanto a especificidade quanto a sensibilidade. As sequências foram obtidas do banco NCBI por meio da ferramenta entrez-direct e processadas no ambiente WSL com uso das ferramentas MAFFT, seqkit e BLAST+. Após curadoria das sequências e filtragem por comprimento (200–800 pb), foram definidos os conjuntos amostrais finais: n = 492 sequências para o grupo alvo (Leishmania spp.) e n = 40 para o grupo não-alvo (T. cruzi). As sequências foram alinhadas usando a ferramenta MAFFT, e um algoritmo baseado em sliding window desenvolvido em Python identificou a melhor região candidata com base em critérios quantitativos de conservação e divergência. A sequência consenso selecionada apresentou >95% de identidade com Leishmania e ausência de alinhamentos relevantes com T. cruzi, validando sua especificidade. A partir dela, foi projetado um conjunto completo de primers LAMP (F3, B3, FIP, BIP e primers de loop) utilizando o software PrimerExplorer V5. As sequencias dos primers não são apresentadas devida à segredo de inovação. Cada primer foi avaliado individualmente quanto à estrutura e especificidade em buscas BLASTn contra o banco nr/nt. Os resultados demonstraram alta similaridade com Leishmania e nenhuma ligação significativa com T. cruzi. O conjunto foi considerado consistente para ensaios moleculares, com potencial diagnóstico diferenciado, os próximos passos envolvem a validação experimental in vitro e a avaliação da eficiência do ensaio LAMP em amostras clínicas. |
| Palavras-chave | LAMP, desenvolvimento de primers, diagnóstico molecular. |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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