“Bicentenário da Independência: 200 anos de ciência, tecnologia e inovação no Brasil e 96 anos de contribuição da UFV”.
8 a 10 de novembro de 2022
Trabalho 17626
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciência e tecnologia de alimentos |
| Setor | Departamento de Tecnologia de Alimentos |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Pedro Oliveira Ávila Ribeiro |
| Orientador | MONIQUE RENON ELLER |
| Outros membros | Jéssica Fernandes Carvalhais, LEANDRO LICURSI DE OLIVEIRA, Mateus Pena Magalhães, Rafael Locatelli Salgado |
| Título | Expressão da proteína da cauda do fago UFV-P2 e conjugação com beads de látex visando o desenvolvimento de kit rápido para detecção de Pseudomonas fluorescens e Pseudomonas aeruginosa |
| Resumo | Para garantir a biossegurança de locais fundamentais para a saúde humana, como em linhas de produção de alimentos e ambientes hospitalares, medidas rígidas de segurança e vigilância sanitária são fundamentais para mitigar os riscos de contaminação, prejuízos financeiros e à integridade física humana. Para conferir tal segurança, a detecção e identificação de microrganismos é essencial para a tomada de decisão e controle preciso de contaminantes e agentes infecciosos. Dentre eles, destacam-se as bactérias do gênero Pseudomonas, cuja problemática é ainda agravada devido à sua capacidade de produção de biofilme. Dessa forma, esse trabalho objetiva o desenvolvimento de um kit de detecção rápida de P. fluorescens e P. aeruginosa. A estratégia de detecção se baseia na expressão e conjugação da proteína da cauda do bacteriófago UFV-P2 com beads de látex seguido pela identificação desses micro-organismos através de reação de microaglutinação. Para isso, o plasmídeo contendo o gene que codifica a proteína foi replicado e extraído de bactérias Escherichia coli DH5α e transferido para E.coli BL21 competentes, por choque térmico. A proteína foi expressa em meio TB adicionado de IPTG 0,3 mM. A proteína foi recuperada da fração insolúvel através da adição de solução de ureia a 8 M e foi posteriormente dialisada. As frações foram analisadas por eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e a concentração de proteína foi estimada por densitometria utilizando o programa ImageJ. As proteínas foram adsorvidas em beads de látex de 1 µm não funcionalizados (Lab261®) e, paralelamente, foi conjugada com beads de 2,5 µm funcionalizados com carboxila (Lab261®). A conjugação da proteína aos beads foi confirmada por SDS-PAGE. O sistema foi posto em contato com suspensões contendo diferentes concentrações das bactérias de interesse, além de um controle negativo contendo a bactéria E. coli e outro contendo apenas solução salina. Proporções variadas dos beads conjugados à proteína foram avaliados em diferentes intervalos de tempo visando a visualização do processo de microaglutinação. Entretanto, nas condições avaliadas até o momento, não foi possível observar a aglutinação na presença das bactérias. Sendo assim, ainda se faz necessário o aperfeiçoamento do processo de conjugação dos beads e de interação entre o sistema e as bactérias, o que possibilitará a produção de uma estratégia prática, com baixos custos e acessível para áreas de interesse. |
| Palavras-chave | microaglutinação, bacteriófago, aglutinação; sistemas de detecção; controle microbiano |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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