“Bicentenário da Independência: 200 anos de ciência, tecnologia e inovação no Brasil e 96 anos de contribuição da UFV”.
8 a 10 de novembro de 2022
Trabalho 17583
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Pós-graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CAPES |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Rafael Júnior de Andrade |
| Orientador | MARIA GORETI DE ALMEIDA OLIVEIRA |
| Outros membros | Halina Schultz, Neilier Rodrigues da Silva Júnior, Rafael de Almeida Barros, Rafael Pereira Barbosa Lopes Garcia |
| Título | Design, expressão heteróloga e caracterização de quimera recombinante de tripeptídeos |
| Resumo | A soja é uma das commodities agrícolas com maior impacto na economia mundial, no ano de 2020 o Brasil produziu 128 milhões de toneladas do grão. A Anticarsia gemmatalis representa uma das principais pragas desfolhadoras da cultura, afetando produtividade e qualidade. O controle dessa lagarta, assim como de outros insetos-praga, é realizado por inseticidas a base de moléculas orgânicas (mas não biomoléculas) ou cultivares transgênicas. Entretanto, o uso de agroquímicos tem se tornando indiscriminado, acarretando uma série de consequências negativas. Visamos o desenvolvimento sintético e a expressão heteróloga de um peptídeo quimérico recombinante com alta capacidade inseticida, que possa ser utilizado como modelo na produção de peptídeos miméticos, pulverizados nas plantas, ou gerar dados para o desenvolvimento de plantas transgênicas. A sequência de resíduos de aminoácidos do peptídeo recombinante foi elaborada tendo como base dois tripeptídeos com atividade inibitória para tripsina-like, já bem caracterizados pelo grupo de pesquisa. A sequência codificadora da quimera foi sintetizada e incorporada em vetor plasmidial contendo códons preferenciais para expressão em E. coli e Plantas. As colônias bacterianas transformadas foram inoculadas em meio LB com ampicilina e mantidas sob agitação a 37 °C. O reagente IPTG foi acrescentado na fase midi-log de crescimento para ativar o promotor. Após a expressão, a cultura foi centrifugada e submetida a lise celular. A escolha do método de purificação do peptídeo baseou-se na expressão do recombinante fusionado a uma His-Tag. As amostras foram analisadas em SDS-PAGE a 15% e os géis corados com nitrato de prata. Após análise em gel, as amostras foram preparadas para injeção em espectrometria de massa. A confirmação da transformação ocorreu por miniprep e eletroforese em gel de agarose a 1%. Para o peptídeo em questão o valor da massa calculada foi de 8,5 kDa. Com base na resina usada para purificação, ficou perceptível a necessidade de otimização no processo. A banda correspondente a peptídeos com massa calculada de 8,5 kDa foi excisada e tripsinizada in-gel. A presença do peptídeo desejado foi confirmada por LC/MS. Com as confirmações supracitadas, os próximos passos consistem em otimização das condições de expressão, purificação, concentração e quantificação do peptídeo para posterior uso em ensaios in vitro de inibição sobre enzimas tripsina-like purificadas do intestino de A. gemmatalis. Além disso, os peptídeos serão adicionados à dieta da lagarta para avaliar a mortalidade e o potencial para transformação transiente em folhas de soja, visando futuramente uma nova estratégia para o controle de pragas agrícolas. |
| Palavras-chave | Interação planta-praga, lagarta da soja, bioinseticida |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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