Resumo |
Os sarcomas de tecido mole (do inglês, soft tissue sarcoma ou STS) são neoplasias malignas que englobam diversos tipos de tumores de tecidos de origem mesenquimal. Aproximadamente 50% pacientes acometidos por este tipo de tumor têm sobrevida média próxima de 5 anos e mais de 25% desenvolvem metástase. Os cães são acometidos por STSs de forma muito semelhante aos humanos, o que os torna grandes candidatos a modelo experimental para este tipo de sarcoma, tornando necessário o desenvolvimento de técnicas diagnósticas eficazes. A imuno-histoquímica (IHQ) é uma técnica que pode ser empregada para identificar e avaliar marcadores prognósticos de malignidade em tecidos tumorais. A alfa-b cristalina (CRYAB) é uma proteína de choque térmico que, nos últimos anos, vem sendo relacionada ao desenvolvimento de metástases e angiogênese de tumores em humanos. O objetivo deste trabalho é relacionar a expressão da CRYAB com os graus histológicos que levam em conta a quantidade de figuras mitóticas das células, necrose e diferenciação tecidual do tumor. Entre 2017 e 2021 o Laboratório de Patologia do Departamento de Veterinária da UFV diagnosticou, por meio de avaliação e graduação histopatológica, 136 casos de STSs em cães, com idades entre 9 meses e 18 anos, com sua maior prevalência entre pacientes idosos (7 anos ou mais) com 84 casos. Todos os casos foram analisados, tendo sido selecionadas 10 amostras de cada grau histológico (I, II e III) e, como controle positivo, uma amostra de tecido renal de cão, que expressa a CRYAB naturalmente. A fim de validar a técnica, foi realizado experimento piloto utilizando o mesmo protocolo de IHQ empregado para tumores de mama pelo nosso grupo de pesquisa. A recuperação antigênica foi realizada em solução tampão citrato pH 6,0 aquecida a 95⁰C em dois ciclos de 5 minutos e resfriadas ao ar livre por 30 minutos, seguido por três imersões por 2 minutos em água destilada. Depois, foi utilizado o bloqueador de peroxidase por 10 minutos, os cortes foram lavados com água destilada e incubados com o bloqueador de proteína por mais 10 minutos em temperatura ambiente. Os anticorpos primários anti-CRYAB foram incubados por 1 hora a 37⁰C e lavados três vezes com PBS pH 7,4 durante 2 minutos cada. Os cortes foram incubados com o polímero por 20 minutos, lavados três vezes com PBS pH 7,4 por 2 minutos e incubados por 5 minutos com o cromógeno DAB. A contracoloração foi realizada com hematoxilina; as lâminas foram montadas e a avaliação foi feita de acordo com a intensidade da marcação e quantidade de células marcadas. Como resultado, observou-se que as lâminas tumorais dos grupos I e II foram discretamente coradas pela técnica, e as lâminas do grupo III e controle sem coloração visível, demonstrando uma falha na técnica e a necessidade de ajustes no protocolo antes que novas tentativas sejam realizadas. |