“Bicentenário da Independência: 200 anos de ciência, tecnologia e inovação no Brasil e 96 anos de contribuição da UFV”.
8 a 10 de novembro de 2022
Trabalho 17261
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Bárbara Braga Ferreira |
| Orientador | GUSTAVO COSTA BRESSAN |
| Outros membros | Arthur Wakim Enrici, Elói Quintas Gonçalves da Silva, Larissa Coelho Pereira, Luana de Sousa Ramos |
| Título | Expressão e purificação de um antígeno recombinante quimérico de leptospirose animal produzido em Escherichia coli para fins vacinais |
| Resumo | A leptospirose é um problema de saúde pública que afeta principalmente a população mais carente, seja em países desenvolvidos ou emergentes. Ela é causada por uma bactéria Gram negativa, do gênero Leptospira e o contágio se dá pelas mucosas, normalmente pela pele quando lesionada ou exposta por um longo período a águas contaminadas. Existem mais de 200 sorovares descritos de Leptospira e estes devem estar presentes nas atuais vacinas clássicas disponíveis, que possuem limitações de potência e eficácia. Uma forma de contornar esse problema é através do desenvolvimento de vacinas recombinantes consideradas mais seguras e possíveis de serem abrangentes na proteção contra os diferentes tipos de sorovares da bactéria. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi expressar um antígeno recombinante quimérico de Leptospira spp. para fins vacinais através da bactéria Escherichia coli. Para tal, plasmídeos de expressão foram construídos e utilizados para transformar células competentes de E. coli por meio da técnica de choque térmico. A seleção foi realizada em placas de ágar LB contendo o antibiótico canamicina. Em seguida, um clone contendo a construção plasmidial foi inoculado em meio LB acrescido de canamicina e incubado sob agitação. Por conseguinte, a expressão foi induzida pelo indutor isopropil β-D-1-tiogalactopiranosídeo. Após esse período, a indução foi centrifugada e o pellet obtido foi ressuspendido em tampão de lise Tris (50mM) / NaCl (150 mM) (pH 8,0). As células foram então lisadas e a fração solúvel foi obtida e utilizada para purificação. Por intermédio da técnica de Cromatografia de Afinidade – FPLC, a proteína foi purificada em uma coluna de níquel devido a sua cauda de histidina que interage com os íons presente na mesma. As amostras purificadas obtidas foram analisadas em gel SDS-PAGE. Pode-se constatar então que a proteína foi expressa e purificada foram com excelência, o que abre caminho para etapas subsequentes de desenvolvimento da vacina pretendida. |
| Palavras-chave | Leptospirose, antígeno recombinante, expressão e purificação |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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