Resumo |
As proteínas de reserva do milho são classificadas em famílias por similaridade de sequência primária. A classe das prolaminas de milho foi caracterizada em zeínas e podem ser classificadas nas classes (α, β, γ e δ-zeínas). Em milho-pipoca, as α-zeínas estão relacionadas com a dureza do endosperma e com a capacidade de expansão. Com isso, o objetivo foi caracterizar, para os teores de classes zeínas, populações UFV-MP5 (temperada) e Beija-Flor (tropical) de milho-pipoca, com 183 e 103 acessos, respectivamente. Os grãos foram pesados (7g), em seguida foi removido o pericarpo e o embrião, os endospermas foram secos, moídos e as amostras desengorduradas por duas vezes. A extração de zeínas foi realizada a partir de duas extrações sucessivas, sendo uma de proteínas totais e outra de zeínas totais. A primeira extração foi realizada pela adição, em micros tubos, de 1 mL do tampão de extração (0.0125 mM de borato de sódio, pH 10; 1% SDS (v/v); 2% 2-β-Mercaptoetanol) à farinha desengordurada. Após a adição, os micros tubos permaneceram sob agitação em Shaker (3 h; 25°C; 130 RPM), seguido de centrifugação (15 min; 25°C; 13300 g). O sobrenadante representa a porção proteica do extrato, portanto foi a fração utilizada para extração de zeínas totais. A extração de zeínas foi realizada com base na adição de etanol absoluto ao sobrenadante, obtendo um extrato com 70% de solução alcoólica (v/v). Os micros tubos foram incubados overnight sob agitação em Shaker (16h; 4°C; 30 RPM) seguido de centrifugação (15 min; 4°C; 13300 g). Os extratos de zeínas totais e subunidades foi realizada utilizando o sistema Agilent 2100 Bioanalyzer e o Kit Agilent Protein 80. As estimativas das zeínas totais e de subunidades foram obtidas utilizando o Software Agilent 2100 expert. As diferenças populacionais foram avaliadas segundo teste F a 5% de significância. Foram identificadas 5 classes de zeínas com base na massa molecular (10, 19, 21, 22 e 27 kDa). A partir do teste F foi observado que as populações são divergentes para as classes 19, 21, 22 e 27 kDa. A subunidade 19 kDa, classificada como α-zeínas, foi a subunidade com maior percentual em relação as demais classes nas populações. Os percentuais médios foram de 37,63% e 46,12% para população temperada e tropical, respectivamente. Foi observado que 5,82% dos acessos da população tropical apresentaram percentuais acima de 60%, enquanto que na população temperada foi de 89,25%. A subunidade de 22 kDa foi a segunda classe com maior percentual nas populações. As estimativas para a subunidade de 22 kDa, classificada como α-zeínas, apresentaram médias de 23,54 e 32,95% para população temperada e tropical, respectivamente. Por fim, conclui-se que há predominância da α-zeínas de 19 kDa na população temperada, enquanto na população tropical, há predomínio da subunidade da α-zeínas de 22 kDa. A classe de 21 kDa foi observada majoritariamente na população tropical, indicando ser uma isoforma de α-zeínas associadas a origem da população. |