“Bicentenário da Independência: 200 anos de ciência, tecnologia e inovação no Brasil e 96 anos de contribuição da UFV”.
8 a 10 de novembro de 2022
Trabalho 16970
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Imunologia |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | CNPq/Balcão |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Fabiana Martins Costa Fontes |
| Orientador | SERGIO OLIVEIRA DE PAULA |
| Outros membros | Camilla Garcia Regis Leite, Luciana de Souza Fernandes |
| Título | Clonagem da poliproteína estrutural do vírus Mayaro em Escherichia coli |
| Resumo | O vírus Mayaro (MAYV), pertencente à família Togaviridae, é considerado um arbovírus que provoca uma febre aguda acompanhada de vômito, diarreia e dores articulares, que podem evoluir para um quadro crônico e debilitante de artrite e miosite. MAYV tem como principal vetor o mosquito Haemagogus janthynomis frequentemente encontrado na região amazônica. Porém, já foi observado que o Aedes aegypti também é capaz de transmitir o vírus, gerando uma grande preocupação visto que este vetor é urbanizado e com isso, aumenta o potencial de emergência de MAYV em áreas com maior densidade populacional. Este cenário enfatiza a necessidade de se desenvolver alternativas que visem proteger a população por meio do combate ao vírus, uma vez que ainda não há vacinas ou tratamento específicos para este vírus. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo a clonagem da poliproteína estrutural de MAYV em Escherichia coli. Inicialmente, foi obtida comercialmente a construção contendo a sequência referente a poliproteína estrutural de MAYV, a qual contém as proteínas do capsídeo, do envelope viral E1, E2 e E3, e a proteína 6k em vetor pPICZαA. A seguir, foi realizada uma transformação utilizando células competentes de E. coli da linhagem TOP10F por eletroporação. Em seguida, os transformantes foram selecionados e cultivados em meio LB low salt contendo o antibiótico zeocina e estocadas em glicerol 20%. A seguir, foi realizada a extração do DNA plasmidial por lise alcalina e confirmação da transformação por meio de PCR utilizando os primers senso 5’-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3’ e antissenso 5’-GGCAATGGCATTCTGACATCCT-3’, específicos para o promotor AOX1 presente na construção. A análise da PCR foi feita por eletroforese em gel de agarose 1%. A clonagem foi confirmada pela observação de banda no tamanho esperado do inserto, de 4256 pb. O DNA plasmidial extraído será utilizado em experimentos futuros, que visam a expressão heteróloga das proteínas estruturais de MAYV sob a forma de virus-like particles (VLPs) pela levedura Komagataela phaffii. As VLPs serão aplicadas no desenvolvimento de um candidato vacinal contra o vírus, além da confecção de novos kits diagnóstico. |
| Palavras-chave | Mayaro, Poliproteína, Clonagem |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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