“Bicentenário da Independência: 200 anos de ciência, tecnologia e inovação no Brasil e 96 anos de contribuição da UFV”.
8 a 10 de novembro de 2022
Trabalho 16888
| ISSN | 2237-9045 |
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| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Igor Nogueira Soares |
| Orientador | ELIZABETH PACHECO BATISTA FONTES |
| Outros membros | Marco Aurelio Ferreira, PEDRO AUGUSTO BRAGA DOS REIS, Ruan Maloni Teixeira |
| Título | Mapeamento de elementos cis-regulatórios que controlam a atividade do repressor transcricional LIMYB em promotores regulados |
| Resumo | Plantas são seres constantemente expostos à ação de diversos microrganismos, como patógenos virais. A via de sinalização mediada pelo receptor NIK1 (NSP-INTERACTING KINASE 1) propaga um sinal antiviral que protege plantas contra begomovírus. A ativação de NIK1 por sinais bióticos provoca a fosforilação da PROTEÍNA RIBOSSOMAL L10 (RPL10) causando a sua translocação do citoplasma para o núcleo onde interage com LIMYB (L10-INTERCATING MYB DOMAIN-CONTAINING PROTEIN) e o complexo formado reprime a expressão de um conjunto de genes relacionados com a maquinaria de tradução, comprometendo assim a síntese de proteínas virais. Portanto este mecanismo de defesa é mediado pela atividade repressora de LIMYB sobre os genes envolvidos em tradução. Resultados recentes de análises de ChIP-seq e RNA-seq determinaram o conjunto de genes (regulon) regulados negativa e positivamente por LIMYB. Foi também determinado os cis-elementos regulatórios enriquecidos nos promotores de genes do regulon de LIMYB. Os objetivos da presente investigação foram (i) determinar se LIMYB regulava diretamente a atividade dos promotores de genes selecionados do seu regulon e (ii) se os cis-elementos previstos por ChIP-seq eram cis-elementos funcionais requeridos para atividade de LIMYB nestes promotores. O primeiro objetivo foi investigado por ensaios de transativação de promotores em folhas de N. benthaniana. Para isso, os promotores dos genes RPL18 e RPL25 foram fusionados a luciferase e a atividade dos promotores avaliada na presença e ausência de LIMYB. Inclusão de LIMYB no ensaio reprimiu diretamente a atividade dos dois promotores avaliados, indicando que LIMYB funciona como repressor transcricional. Para o segundo objetivo, os promotores regulados por LIMYB foram truncados e foi avaliada a capacidade de LIMYB em reprimir os promotores truncados. Além disso, os cis-elementos regulatórios, presentes nestes promotores regulados por LIMYB, foram mutados para avaliar o efeito da sequencia na atividade repressora de LIMYB. A deleção dos elementos cis-regulatórios nos promotores truncados diminuiu a atividade repressora de LIMYB, sendo totalmente abolida em promotores mínimos sem qualquer cis-elemento definido. Estes resultados indicaram que a atividade repressora transcricional de LIMYB depende dos elementos cis-regulatórios nos promotores regulados. Para confirmar estes resultados, os elementos cis-regulatórios foram mutados nos promotores regulados por LIMYB e o efeito das mutações na atividade repressora de LIMYB está sendo avaliado em ensaios de transativação em folhas de N. benthamiana. |
| Palavras-chave | NIK1, geminivirus, cis-elementos |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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