“Bicentenário da Independência: 200 anos de ciência, tecnologia e inovação no Brasil e 96 anos de contribuição da UFV”.
8 a 10 de novembro de 2022
Trabalho 16860
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | FAPEMIG |
| Primeiro autor | Arthur Wakim Enrici |
| Orientador | GUSTAVO COSTA BRESSAN |
| Outros membros | Bárbara Braga Ferreira, Elói Quintas Gonçalves da Silva, Larissa Coelho Pereira, Luana de Sousa Ramos |
| Título | Expressão e purificação de um antígeno recombinante produzido em Escherichia coli com potencial imunogênico contra leptospirose animal |
| Resumo | As bactérias patogênicas do gênero Leptospira, são responsáveis por causar a leptospirose, zoonose emergente, endêmica e de incidência global. Apesar dessas bactérias serem mantidas no ambiente através de animais roedores, diferentes espécies de animais domésticos e silvestres também podem servir como vetores para a doença. As infecções podem afetar os humanos a partir do contato com a urina dos animais portadores de leptospiras patogênicas, principalmente em regiões onde enchentes são regulares e/ou o saneamento básico é precário. No Brasil, os dados da doença merecem certa atenção pois no período de 2010 a 2015 foram confirmados 24.671 casos, sendo 2.078 óbitos. No entanto, devido à dificuldade e morosidade do diagnóstico, estes números podem apresentar subnotificações acentuadas. Apesar de ser uma das ferramentas mais importante e eficaz para o controle das doenças infecciosas, ainda não foi possível desenvolver uma vacina segura contra leptospirose. Isso deve-se à capacidade das Leptospiras patogênicas desenvolverem habilidades para evitar os mecanismos defensores do organismo. Dessa forma, o objetivo deste trabalho é expressar um antígeno recombinante em Escherichia coli que seja capaz de induzir uma resposta imune protetora contra a leptospirose animal. A transformação com o plasmídeo de interesse foi realizada com a técnica de choque térmico em E. coli, seguido de plaqueamento das células transformadas com a construção plasmidial em placa de Petri contendo meio LB ágar e antibiotico. O procedimento de indução foi realizado para observar se a cepa de E. coli utilizada foi capaz de produzir a proteína de interesse. A proteína foi recuperada por lise celular utilizando sonicação em gelo, para evitar aquecimento da amostra e possível precipitação. Após a centrifugação, foi observado a formação de um extenso pellet e, para confirmar a presença da quimera neste extrato e verificar a eficiência do processo de produção, foi realizado a Eletroforese em Gel SDS-PAGE. Por fim, utilizando a técnica de FPLC (do inglês Fast Protein Liquid Chromatography), a proteína foi purificada ao passar por uma coluna de afinidade. Com isso, pode-se observar que foi possível produzir, expressar e purificar a proteína de interesse com sucesso. Esta proteína purificada será utilizada em testes in vivo para analisar seu potencial como antígeno contra leptospirose. |
| Palavras-chave | Leptospirose, Purificação, Expressão |
| Forma de apresentação..... | Painel |
| Link para apresentação | Painel |
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