“Bicentenário da Independência: 200 anos de ciência, tecnologia e inovação no Brasil e 96 anos de contribuição da UFV”.
8 a 10 de novembro de 2022
Trabalho 16465
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | Não se Aplica |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Primeiro autor | Edlêla Sabino Silva |
| Orientador | JULIANA LOPES RANGEL FIETTO |
| Outros membros | Joice de Melo Agripino |
| Título | Otimização da etapa de pré-purificação das HDACs 1 e 3 recombinantes de Leishmania braziliensis . |
| Resumo | As Leishmanioses são doenças tropicais negligenciadas causadas por diferentes espécies de protozoários parasitas do gênero Leishmania. A leishmaniose tegumentar provocada pela espécie Leishmania braziliensis é a de ocorrência mais comum no Brasil e nas Américas, sendo caracterizada pelo aparecimento de feridas na pele de difícil cicatrização (forma tegumentar), e que podem atingir mucosas como o nariz e boca (forma mucocutânea). A quimioterapia disponível para o tratamento é escassa e possui desvantagens como graves efeitos colaterais e aparecimento de parasitas resistentes. A acetilação de histonas é uma modificação pós-traducional que permite o acesso de maquinarias de replicação e transcrição ao DNA. As histonas deacetilases (HDACs), são enzimas que promovem a deacetilação de histonas dos nucleossomos reprimindo a transcrição gênica de forma epigenética. Em trabalho anterior do grupo de pesquisa foram selecionados 3 inibidores de HDAC (HDACi) potenciais para o desenvolvimento de novos fármacos, uma vez que foram capazes de inibir a infecção in vitro e in vivo em modelo murino. L. braziliensis possui em seu genoma 4 genes codificadores de HDACs, que se apresentam como possíveis alvos dos HDACi. O objetivo geral deste trabalho é a expressão heteróloga das HDAC1 e HDAC3 de L. braziliensis, a otimização do processo de purificação destas proteínas recombinantes, visando aplicações na produção de anticorpos policlonais e na validação de alvos dos HDACi. Para isso, o sistema de expressão heterólogo utilizado foi pET30b em Escherichia coli BL21 (DE3 RIL) em meio Luria Bertani (LB) e indução com IPTG. Após a expressão heteróloga, foi testado o protocolo de congelamento/descongelamento a -20°C overnight (ON) dos corpos de inclusão (CI) na etapa de pré-purificação das proteínas recombinantes. Os CI contendo as proteínas recombinantes foram solubilizados em tampões de ureia de diferentes concentrações (2 a 8 M), analisados em gel de poliacrilamida a 10% e avaliados por Western Blot. Foi observado que através do congelamento/descongelamento ON foi possível obter a proteína recombinante pré-purificada a partir da concentração de 2 M de ureia. Esta é uma vantagem diante dos protocolos convencionais que usam altas concentrações de agentes desnaturantes para solubilizar corpos de inclusão, em sucessivas etapas de lavagens. Assim, foi possível obter as proteínas recombinantes de uma maneira mais simples, econômica e em uma condição mais branda, possivelmente menos desnaturada e parcialmente purificada, o que facilita os passos sequenciais do processo de purificação e de aplicação das HDACs recombinantes. |
| Palavras-chave | Leishmaniose, histonas deacetilases (HDACs), proteínas recombinantes. |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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