“Bicentenário da Independência: 200 anos de ciência, tecnologia e inovação no Brasil e 96 anos de contribuição da UFV”.
8 a 10 de novembro de 2022
Trabalho 16385
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, Outros |
| Primeiro autor | Luana Maria Pacheco Schittino |
| Orientador | TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Outros membros | Gabriele Lopes Knop, Jacqueline de Araújo Fiuza, Renato Lima Senra |
| Título | Expressão heteróloga de glicoproteínas terapêuticas em linhagens otimizadas de Leishmania tarentolae |
| Resumo | A glicosilação é um tipo de modificação pós-traducional de suma importância para algumas proteínas. A adição de um padrão de carboidratos confere a determinadas proteínas a capacidade de realizar um enovelamento correto, e consequentemente permite que elas desempenhem sua função de forma eficaz no organismo. A produção industrial de glicoproteínas é um mercado crescente em virtude do potencial uso terapêutico das mesmas. Entretanto, como é ainda muito dependente da cultura de célula de mamíferos, apresenta elevado custo, rendimento mediano e dificuldade de manuseio. O protozoário tripanossomatídeo Leishmania tarentolae tem sido sugerido como uma alternativa interessante a estes empecilhos pois, além de possuir bom rendimento, é de cultivo relativamente simples, apresenta padrão de glicosilação similar ao de células de mamíferos e não é patogênico para humanos. Sendo assim, o presente estudo tem o objetivo de, através da utilização de uma população geneticamente aprimorada de Leishmania tarentolae, otimizar a expressão de glicoproteínas para produção em grande escala. A princípio, selecionou-se três alvos proteicos, entre eles o fator VII da cascata de coagulação sanguínea, interferon-α e interferon-β e analisou-se as respectivas sequências para síntese otimizada dos genes e de primers específicos. Os vetores (pET28-a, pGEM-T Easy e pLEXSY) contendo os genes de interesse foram obtidos por clonagem molecular e confirmados por PCR. A inserção dos genes em L. tarentolae foi realizada por digestão com enzima de restrição e subsequente transfecção. As células transfectadas foram selecionadas com antibióticos e submetidas ao crescimento com agitação. O padrão de expressão proteico foi observado e comparado ao de leishmania selvagem por SDS-PAGE. A confirmação da expressão dos genes e produção das proteínas pelo microrganismo foi realizada por Western Blot. Almeja-se expressar os genes também em E. coli e comparar a funcionalidade das proteínas em relação a adição ou não da sequência de carboidratos após sua tradução. Por fim, é esperado que as proteínas expressas em L. tarentolae se apresentem estrutural e funcionalmente semelhantes às de células de mamíferos e superiores às de E. coli, viabilizando assim produção de glicoproteínas recombinantes de maior quantidade, qualidade e facilidade para o mercado terapêutico. |
| Palavras-chave | glicosilação, Leishmania tarentolae, expressão heteróloga |
| Forma de apresentação..... | Vídeo |
| Link para apresentação | Vídeo |
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