Resumo |
Fungos produzem toxinas, antibióticos, hormônios de crescimento e outras substâncias de potencial interesse biotecnológico. Em projeto anterior foram isoladas as substâncias isoaigialona A, B e C e aigialona do fungo endofítico Phaeoacromonium sp., as quais apresentaram atividade in vitro contra fungos e células cancerígenas. Para obter estas substâncias em quantidade suficiente para realização de novos bioensaios o fungo foi crescido no meio batata dextrose ágar BDA por sete dias, na sequência foi repicado para o meio caldo de batata dextrose e cultivado por 28 dias. Após este período, o caldo fermentado foi separado do micélio, extraído com acetato de etila e seco em rotaevaporador resultando no extrato. O extrato foi diluído em metanol, filtrado em membrana de 45 µm, injetado em cromatógrafo líquido de alta eficiência (CLAE). Como fase estacionária utilizou coluna Phenomenex, modelo Gemini (250 x 25 mm, 10 micras) e eluente Acetronila/Água 54/46, com fluxo de 5 mL/min. Foram separadas as isoaigialona A (25,0 mg), B (25,0 mg) e C (6,0 mg) e aigialona (64,6 mg). A pureza das substâncias separadas foi evidenciada por CLAE analítico. Para otimizar o processo de extração, buscou utilizar extração em fase sólida (SPE) como alternativa a extração líquido-líquido com AcOEt. Para tanto a substância isoaigialona A, com menor tempo de retenção e menor interação com a fase estacionária foi utilizadas para avaliar a eficiência SPE. A partir da isoaigialona A purificada obteve-se a curva de calibração (Y= 0,000000034722X – 0,00057 com R2=0,99), a qual foi utiliza para avaliar a eficiência do cartucho da marca Sylicycle (SiliaPrep C18, 500mg) com fluxo de 1,0 mL/min na retenção das substâncias alvo do caldo fermentado. Foram coletadas 35 frações de 10 mL cada, estas foram analisadas por CLAE e resultou na obtenção da curva de ruptura para o leito em fluxo contínuo (SPE), o ponto de ruptura foi de 200 mL e de saturação de 350 mL. Os dados foram ajustados para o modelo de Thomas, sendo os parâmetros constante de Thomas (Kt) e capacidade máxima de adsorção (q0) obtidos pela minimização da soma dos quadrados dos erros (SSE), entre o modelo Thomas e dos dados experimentais utilizando a ferramenta Solver do Microsoft Excel®. Obteve valores ajustado de Kt=1,74 mL/min x mg e q0=14,23 mg/g, com valor de SSE de apenas 0,0648. A SPE se mostrou eficiente em reter as substâncias estudadas. Na próxima fase do projeto buscará otimizar volume, fluxo e proporção entre solventes para buscar obter frações contendo as substâncias puras ou em mistura mais simples. |