Bioeconomia: Diversidade e Riqueza para o Desenvolvimento Sustentável
21 a 25 de outubro de 2019
Trabalho 12463
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Ciências Agrárias |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Samuel Lessa Barbosa |
| Orientador | MARIA GORETI DE ALMEIDA OLIVEIRA |
| Outros membros | Gabriele Corrêa da Rocha, HUMBERTO JOSUE DE OLIVEIRA RAMOS, João Vitor Aguilar de Oliveira, Neilier Rodrigues da Silva Júnior |
| Título | Caraterização dos inibidores de serino proteases isoladas da hemolinfa de Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) |
| Resumo | Os inibidores de serino proteases se encontram distribuídos nos insetos em diferentes tecidos, possuindo diversas funções e características. Na hemolinfa, atuam sob a regulação do sistema imune contra patógenos, ativando cascatas enzimáticas que promovem a síntese e liberação de peptídeos antimicrobianos, além de participar da via de melanização. O objetivo deste trabalho foi identificar, classificar e obter a sequência proteica dos inibidores de serino proteases tipo SERPIN presentes na hemolinfa de Anticarsia gemmatalis. Para isso, foi coletada hemolinfa de A. gemmatalis no segundo dia do quinto instar. Imediatamente após a coleta, uma solução de feniltiouréia na concentração final de 2% foi adicionanda com a finalidade de se evitar a melanização. A amostra obtida foi centrifugada a 3000 g por 15 min para obtenção da hemolinfa livre de hemócitos (HLH). Em seguida, a HLH foi submetida a três cromatografias subsequentes: afinidade, troca iônica e dessalinização, além da separação por filtro de corte de 50 kDa. Os processos de purificação foram acompanhados por ensaios de inibição utilizando, separadamente, proteases intestinais do próprio inseto, tripsina bovina comercial e papaína comercial. As frações que apresentaram inibição foram submetidas a eletroforese unidimensional para analisar o perfil proteico. Posteriormente, as bandas foram submetidas a digestão tríptica e analisadas por LC-MS/MS. As listas de massas geradas pelo espectrômetro de massas, foram confrontadas ao banco de dados EnsemblMetazoa, com o organismo modelo para Lepidoptera (Bombix mori) por meio do programa PEAKS. Ao comparar o processo de purificação, tendo como enzimas alvo a tripsina e a papaína, foram obtidos valores de unidades inibitórias (UI) menores para os ensaios da primeira em relação à segunda. As amostras que apresentaram inibição de proteases na última etapa de purificação evidenciaram bandas em torno de 38 ± 2 kDa e 90 ± 9 kDa. A banda de 38 kDa foi identificada como o inibidor tipo serpin-4 descrita como antichymotrypsin-2. Estes resultados representam uma nova alternativa na busca de peptídeos para serem utilizados como ferramentas no controle de insetos pragas. |
| Palavras-chave | Lagarta-da-soja, Perfil proteico, Purificação |
| Forma de apresentação..... | Oral |