Resumo |
Neste estudo, objetivamos investigar o metabolismo energético do músculo esquelético de bovinos identificados para baixo e alto consumo de alimentar residual (CAR) usando abordagem proteômica. Avaliou-se ainda a expressão de microRNAs candidatos como um dos possíveis mecanismos que controlam a biossíntese das proteínas envolvidas no metabolismo energético identificadas como diferencialmente abundantes entre animais com alto e baixo CAR. Amostras de tecido muscular esquelético foram obtidas do total de 18 bovinos Nelore (n=9 para alto e n=9 para baixo CAR) no momento do abate e foram imediatamente congeladas e mantidas em nitrogênio líquido até o processamento das mesmas. As amostras foram posteriormente maceradas em nitrogênio líquido e utilizadas para extração de proteínas e ácidos nucleicos. Foi realizada a separação de proteínas por eletroforese bidimensional e, spots diferencialmente abundantes entre os tratamentos, foram excisados, submetidos à digestão tríptica e posteriormente à análise de espectrometria de massas utilizando-se o MALDI-TOF/TOF. As amostras foram também utilizadas para extração de RNA total e de microRNA (miRNA) para quantificação por RT- qPCR. Genes e miRNAs alvo foram obtidos por estudo in silico utilizando-se como input as proteínas diferencialmente abundantes entre os tratamentos. Observou-se maior abundância de 14-3-3 proteína epsilon (P = 0,01) no músculo esquelético de animais de alto CAR. Por outro lado, observou-se maior abundância de Proteína de Choque Térmico Beta 1 (P<0,01) no músculo esquelético de bovinos baixo CAR. Houve aumento da expressão de mRNA de YWHAE, que codifica a proteína epsilon 14-3-3 e menor mais baixa de mRNA de HSPB1, que codifica a Proteína de Choque Térmico Beta 1, no músculo esquelético de animais de alto CAR (P = 0,01). Para os miRNAs envolvidos na expressão da proteína 14-3-3 Epsilon, houv emaior expressão de mi-665 para animais de baixo CAR (P <0,001). Em relação aos miRNAs envolvidos no controle da expressão de HSPB1, maior expressão de miR-34a (P = 0,01) e miR-2899 (P <0,001) foi observada no esqueleto músculo de animais alto CAR. Os resultados sugerem o provável envolvimento do miR-665, miR34a e miR-2899 no controle da produção das proteínas 14-3-3 epsilon e HSPB1 identificadas como diferencialmente abundantes no músculo esquelético de bovinos Nelore identificados como alto e baixo CAR. |