Bioeconomia: Diversidade e Riqueza para o Desenvolvimento Sustentável
21 a 25 de outubro de 2019
Trabalho 12142
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciências Biológicas |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Primeiro autor | Lavínia Aparecida Martin |
| Orientador | GABRIELA PICCOLO MAITAN ALFENAS |
| Outros membros | Danilo Lemes Canettieri, Débora Cristina Pimentel, Maria Cecilia Brangioni de Paula, Maria Eduarda Almeida Pinto |
| Título | Purificação parcial e caracterização bioquímica de endoglucanase produzida pelo fungo Pycnoporus sanguineus |
| Resumo | As enzimas são importantes catalisadores nos sistemas biológicos. As celulases são as enzimas responsáveis pela degradação de celulose, polissacarídeo constituinte da parede celular vegetal, e podem ser subdivididas em três grupos: endoglucanases, exoglucanases e β-glicosidases. Celulases são aplicadas nas indústrias como aditivos em rações animais, na área têxtil, de alimentos, e na obtenção de etanol de segunda geração. Encontradas em diversos organismos, são geralmente obtidas em laboratório por fungos. Este trabalho objetivou analisar a atividade de endoglucanase produzida pelo fungo Pycnoporus sanguineus PF-2. Para esse fim, discos miceliais do fungo P. sanguineus mantido em meio BDA (Batata Dextrose Ágar) foram transferidos diretamente para meios líquidos contendo fontes indutoras, íons para suplementação e extrato de levedura. Para o crescimento do fungo, utilizou-se como fonte de carbono farelo de trigo e farelo de arroz, ambos obtidos comercialmente. Após o crescimento do fungo por 14 dias a 28 ºC, sob agitação a 150 rpm, a atividade de endoglucanase do extrato bruto foi medida utilizando o substrato carboximetilcelulose (CMC 1,25% m/v) pelo método do ácido 3,5-dinitrosalicílico. Glicose foi empregada para construção da curva padrão. Concomitantemente ao teste de atividade foi feita a dosagem proteica. No processo de purificação enzimática, foram empregadas as metodologias de precipitação com sulfato de amônio 40 % e a cromatografia de troca iônica. A confirmação da purificação da endoglucanase foi feita por gel de poliacrilamida 12%. Por fim, a enzima foi caracterizada bioquimicamente quanto à temperatura ótima (30 a 70°C), termoestabilidade (50 e 60 ºC), pH ótimo (4 a 7), estabilidade ao pH (3 a 8) e efeito de íons. Os resultados demonstraram que o farelo de trigo foi a fonte de carbono que induziu a maior produção de endoglucanase. Após a purificação parcial, a atividade específica da enzima aumentou 20 vezes em relação ao extrato bruto. A enzima apresentou atividade ótima a 50 ºC e manteve sua atividade por 24h nesta temperatura. A 60 ºC houve decaimento da atividade em 1h. A enzima apresentou atividade máxima no pH 4 e a exposição aos valores de pH 3 e 4 aumentaram a atividade enzimática após ensaio de atividade em pH 5. A exposição da endoglucanase a MnSO4, MgCl2, CaCl2 e AgNO3 na concentração de 0,01 mM aumentou consideravelmente a atividade enzimática. Conclui-se que a purificação parcial da endoglucanase do fungo P. sanguineus apresentou alto fator de rendimento em apenas dois passos de purificação. Observou-se ainda alta termoestabilidade da enzima em sua temperatura ótima, podendo sua atividade ser acrescida diante da exposição a baixas concentrações de alguns íons. Estas características são de grande importância para a aplicação das enzimas no setor industrial. |
| Palavras-chave | enzimas, endoglucanase, Pycnoporus sanguineus |
| Forma de apresentação..... | Oral |