Bioeconomia: Diversidade e Riqueza para o Desenvolvimento Sustentável
21 a 25 de outubro de 2019
Trabalho 12013
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Ciências Agrárias |
| Setor | Departamento de Zootecnia |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, FUNARBE |
| Primeiro autor | Nathalia Silva Dutra Alves |
| Orientador | SIMONE ELIZA FACIONI GUIMARAES |
| Outros membros | Larissa de Sales Araújo, Lucas Limas Verardo, Susana Amaral Teixeira, Walmir da Silva |
| Título | Análises funcionais de genes candidatos para número total de leitões nascidos em suíno |
| Resumo | Introdução: As características de importância biológica e agrícola são complexas e controladas por uma rede de interações gênicas que podem ser associadas a fatores de transcrição (TF). Estudos contemplando essa associação demostram um importante papel no entendimento do desenvolvimento de características reprodutivas em suínos, podendo identificar genes candidatos para uma determinada característica. A partir disso, genes candidatos para o número total de leitões nascidos em suínos foram identificados, e um SNP localizado na região 5’UTR apresentou maior relevância dentre os outros. Sabe-se que SNPs localizados em regiões reguladoras são importantes na expressão gênica, então vetores com mutações na região 5’UTR foram construídos para analisar a expressão do gene suíno ENSSSCG00000009285, que em humanos está relacionado ao balanço energético e a características reprodutivas. Além disso, sabe-se que a transfecção celular é um método que permite a introdução de ácidos nucleicos em células eucarióticas, entretanto, esse processo depende de vários fatores para que seja bem sucedido, ainda mais quando se usa células de linhagem primária. Objetivos: Analisar a expressão gênica das variantes construídas nos vetores, determinando seu padrão de expressão através da transfecção e ensaios de luciferase. Metodologia: Três mutações foram feitas no gene, sendo elas o SNP rs80989111, relacionado a característica de número total de leitões nascidos, o rs335176351, 12 nucleotídeos do sítio de ligação do TF CREB, e o rs346228480, localizado na região promotora do TF PLAG1. As análises in silico foram feitas usando o MatInspector. A clonagem in vitro da região 5’UTR e do gene foi clonada em plasmídeos pGL2, usando sítio de restrição HindIII, e a mutagênese dirigida para construir os plasmídeos contentos os alelos selvagens foi feita com o QuikChange Lightning Site-Directed Mutagenesis Kit. Após confirmação por sequenciamento, os plasmídeos foram transfectados em células de linhagem primária, que foram cultivadas em DMEM F12, e como meio completo utilizaremos uma receita que consiste em: 10% de soro fetal bovino (SB), 1% de pelincilina/estrepctomicina, 0,5% de gentamicina e 0,01% de antifúngico, O processo de transfecção precisou ser padronizado, e utilizou o plasmídeo pEGFP para isso, além do carreador de material genético PEI (polietilenoimina). Resultados: Os plasmídeos que continham as mutações foram produzidos corretamente. A padronização da transfecção foi finalizada para que fosse possível os ensaios de luciferase. Os ensaios de luciferase não trouxeram resultados significativos, apesar do esforço. Conclusão: Foi possível construir os plasmídeos contendo as mutações para analisar a expressão do gene ligado a número total de leitões nascidos e obter um protocolo de transfecção para posteriores análises. |
| Palavras-chave | interações gênicas, características reprodutivas de suínos, transfecção celular |
| Forma de apresentação..... | Oral |