Bioeconomia: Diversidade e Riqueza para o Desenvolvimento Sustentável
21 a 25 de outubro de 2019
Trabalho 11638
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Ciências Agrárias |
| Setor | Departamento de Veterinária |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Bruna Rafaela Rodrigues Ramos |
| Orientador | ABELARDO SILVA JUNIOR |
| Outros membros | Daniel Augusto Pio de Almeida, Guilherme Gabriel Souza Arthuso, Luiz Fernando Lino de Souza |
| Título | Análise do perfil proteico de isolados de Mycoplasma hyopneumoniae por Nano-LC MS/MS |
| Resumo | Mycoplasma hyopneumoniae (Mhyo) é o principal agente causador da pneumonia enzoótica suína, doença que provoca percas zootécnicas, gastos com antibióticos e vacinas. Estudos proteômicos estão sendo utilizados para avaliação de regiões antigênicas e comparações entre cepas isoladas, no entanto, diversas metodologias vêm sendo utilizadas muita vezes com resultados inconclusivos e ou sem a devida padronização para garantir o rendimento. Este trabalho teve como objetivo avaliar um protocolo de preparação de amostras e identificar qualitativamente o perfil proteico de cepas de Mhyo por LC MS/MS. Para isso, cepas apatogênica (J) e selvagem (UFV02) foram inoculadas em meio Friis 1x e mantidas à 37°C por 72h, após a fase logarítmica de crescimento as amostras foram centrifugadas à 3.500 x g, 15 minutos à 5 °C e lavadas três vezes com PBS (pH 7,4). Como controle apenas meio 1x foi utilizado. As células foram ressuspensas em 1 mL PBS e lisadas por sonicação a 25 Hz por cinco ciclos de 30 segundos com 1 minuto de intervalo em gelo entre os pulsos. Os conteúdos lisados foram centrifugados a 10.000 x g por 20 minutos à 5 °C, sendo os sobrenadantes recuperados armazenadas à -80 °C até o uso. A concentração das proteínas totais foi realizada com uso de fluoróforos por meio do Kit Protein Assay Broad Range Qubit® e através de espectrometria Nanodrop 2000® ThermoScientific™, a avaliação global do perfil proteico foi realizada por eletroforese monodimensional (SDS-PAGE). Foram utilizadas 60 µg de extrato proteico total de cada amostra, sendo essas submetidas à migração por 0,7 mm de resolução em gel SDS-Glicina PAGE 12,5 % (Short-Run). Posteriormente, os géis foram cortados descorados e submetidos à digestão com tripsina. Os peptídeos trípnicos foram concentrados em sistema de centrifugação a vácuo, em seguida, dessalinizados utilizando-se micro colunas de fase reversa C18 (ZipTip®µ-C18). A eluição em solução de ACN 50 %, acidificada com TFA 0,1 %, com rendimentos 4,0 e 0,7 µg/µL para cepa J e UFV02, respectivamente. Com a referida estratégia de análise foram identificadas pela técnica 76 proteínas, sendo que 46 e 68 se encontravam nas amostras J e UFV02, respectivamente. Como proteínas únicas foram detectadas 30 e 8 proteínas exclusivas nas cepas UFV02 e J, respectivamente. Os resultados de Nano LC-MS/MS demonstram que existe a necessidade melhorar o rendimento no preparo de amostras. |
| Palavras-chave | Perfil proteico, espectrometria, eletroforese monodimensional. |
| Forma de apresentação..... | Painel |