Bioeconomia: Diversidade e Riqueza para o Desenvolvimento Sustentável
21 a 25 de outubro de 2019
Trabalho 11554
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Ciências Agrárias |
| Setor | Departamento de Veterinária |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Daniel Augusto Pio de Almeida |
| Orientador | ABELARDO SILVA JUNIOR |
| Outros membros | Bruna Rafaela Rodrigues Ramos, Guilherme Gabriel Souza Arthuso, Luiz Fernando Lino de Souza, Marcus Rebouças Santos |
| Título | Detecção de “outer membrane vesicles (OMVs)” em Mycoplasma hyopneumoniae |
| Resumo | O Brasil é o quarto maior exportador de carne suína do mundo, tendo esse fato em vista, a pesquisa sobre doenças de grande impacto econômico é uma estratégia de extrema importância para a suinocultura industrial. Este é o caso do Mycoplasma hyopneumoniae (Mhyo), bactéria que é a principal causadora de pneumonia enzoótica, doença que provoca percas zootécnicas, gastos com vacinas. As vacinas disponíveis hoje no mercado são produzidas utilizando cepas estrangeiras não patogênicas, o que faz com que os animais sejam apenas parcialmente imunizados, considerando isso, é necessário a criação de uma vacina concebida com cepas de origem nacional, e que tenham imunização que melhor se adaptada a realidade sanitária brasileira. É sugerido que Myho produz Outer Membrane Vesicles, aqui denominadas Vesículas extracelulares (EV’s), que são vesículas secretadas por bactérias em situação de estresse, nelas podem estar contidas fatores de virulência e toxinas, o que faz com essas EV’s tenham potencial vacinal, por serem capazes de gerar resposta imune ao ser introduzida em animais. Este trabalho teve como objetivo a identificação de EVs produzidas por Mhyo cultivado em meio de cultivo Friis 1x. Para isso, amostras da cepa J de Mhyo foram inoculadas em meio Friis 1x e mantidas à 37°C por 72h. Após a fase logarítmica de crescimento foram estressadas com peroxido de hidrogênio (H202) à 250 mM, durante 4 dias consecutivos. Posteriormente as amostras e controle foram processados por centrifugação diferencial (500 x g – 3.000 x g por 15 minutos), lavadas e filtradas (0,45 µm), re-centrifugadas à 11.000 x g por 20 minutos à 4°C. O pellet formado foi utilizado para visualização das maiores EVs, sendo o sobrenadante utilizado para processamento padrão de separação por gradiente de iodixanol. Brevemente, as amostras foram homogeneizadas na proporção 1:3 de iodixanol, sendo aplicadas no tubo gradiente em concentrações de 45%, 40%, 35%, 30%, 25% e 20%. As amostras foram então ultracentrifugadas a 100.000 x g overnight à 4 °C e cada fração coletada para uma segunda ultracentrifugação, de 250.000 x g por 3h a 4°C, com objetivo de separação do iodixanol e formação de pellet. Uma alíquota de cada gradiente foi utilizada para análise do perfil global das vesículas por SDS Page. Os pellets foram fixados, emblocados com resina e processados em cortes ultrafinos. A visualização das frações foi realizada em microscópio eletrônico de transmissão, sendo possível a visualização das EV’s. Em última análise, este trabalho demonstrou a presença de vesículas na condição in vitro. No entanto trabalhos posteriores são necessários para otimização do protocolo de isolamento e purificação de EV’s e no processo de indução do estresse oxidativo. |
| Palavras-chave | mycoplasma, omv, hyopneumoniae |
| Forma de apresentação..... | Painel |