Bioeconomia: Diversidade e Riqueza para o Desenvolvimento Sustentável
21 a 25 de outubro de 2019
Trabalho 11530
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciências Biológicas |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Amanda de Ambrósio Pacheco |
| Orientador | GUSTAVO COSTA BRESSAN |
| Outros membros | Éverton de Almeida Alves Barbosa, Geniana da Silva Gomes, Mônica Maria Magalhães Caetano, Raíssa Gomes de Andrade |
| Título | Clonagem e expressão heteróloga da proteína despolimerizante de actina, Destrin |
| Resumo | As Serine/Arginine Protein Kinases (SRPKs) são classicamente relacionadas ao controle do splicing do pré-mRNA através da fosforilação dos fatores de splicing da família das proteínas SR. SRPK1 e SRPK2 são encontradas superexpressas em diferentes tumores como melanoma, câncer de cólon e leucemia. A desregulação da expressão ou atividade dessas proteínas está associada a mecanismos que controlam a progressão do tumor e formação de metástases. Neste sentido, estudos envolvendo as SRPKs são importantes para o desenvolvimento de novas estratégias antitumorais. Um ensaio de duplo híbrido realizado pelo nosso grupo de pesquisa mostrou uma possível interação entre SRPK2 e a Destrin, uma proteína da família das Cofilinas que apresenta atividade de despolimerização dos filamentos de actina. Este trabalho teve como objetivo, portanto, a clonagem, padronização da expressão e purificação da proteína Destrin para ser utilizada, posteriormente, em um ensaio de polimerização de actina na presença ou ausência de SRPK2. As atividades realizadas consistiram na clonagem do cDNA que codifica para Destrin em vetor de clonagem e em vetor de expressão procarioto. Em seguida foi feita a padronização da expressão heteróloga de Destrin e a tentativa de purificá-la. A expressão da Destrin foi induzida em Escherichia coli BL21, sob condição de 0,5 mM de IPTG e incubação a 18 °C por 16 h. Inicialmente foram realizados ensaios de purificação de Destrin na fração solúvel do lisado de E. coli utilizando a resina His-Select Nickel Affinity Gel (Sigma), entretanto os resultados sugeriram a necessidade de realizar novos passos de purificação. Assim, estratégias de purificação utilizando uma coluna de troca catiônica, capto S (GE Healthcare), e uma coluna de troca aniônica, capto Q (GE Healthcare), tem sido tentadas, mas sem sucesso até o momento. Tal fato tem sido evidenciado pelos experimentos de western blotting utilizando o anticorpo primário anti-His. Portanto, a clonagem de Destrin no vetor de expressão e sua expressão na fração solúvel de E. coli BL21 foi evidenciada, porém experimentos visando a purificação de forma satisfatória ainda encontram-se em andamento. |
| Palavras-chave | Destrin, SRPK, expressão |
| Forma de apresentação..... | Oral |