Bioeconomia: Diversidade e Riqueza para o Desenvolvimento Sustentável
21 a 25 de outubro de 2019
Trabalho 11353
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciências Biológicas |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Yasmim do Nascimento Canizo |
| Orientador | TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Outros membros | Ananda Pereira Aguilar, ANDREA DE OLIVEIRA BARROS RIBON, Higor Sette Pereira, Jordana Macedo Simoes |
| Título | Padronização de primers e PCR de fusão para desenvolvimento de metagenômica de duplo alvo: aplicação em identificação de resistência bacteriana e enzimas fúngicas |
| Resumo | Metagenômica é uma metodologia que permite estudar uma comunidade de microorganismos, incluindo os não cultiváveis, ao mesmo tempo utilizando técnica de sequenciamento de alto escala ligada a amplificação de marcadores taxonomicos tais como 16S bacteriano e ITS fúngico. Porém esta metodologia falha na dupla identificação de genes funcionais de interesse conjuntamente a determinação de espécies que possuam estes genes devido ao processo de lise celular e fragmentação do DNA antes do sequenciamento. Tais processos dificultam a identificação por exemplo de enzimas de fungos de interesse biológico tais como as enzimas ativas sobre carboidratos (CAZymes) que tem como objetivo degradar polissacarídeos em açúcares fermentáveis e enzimas de resistência bacteriana com aplicação em saúde humana e animal. O objetivo deste trabalho foi padronizar primers e um protocolo de PCR em fusão para amplificação de dois genes marcadores do mesmo organismo para uso em metagenômica e aplicar esta nova tecnologia para o estudo de genes de resistência em bactérias e identificação enzimas ativas sobre carboidratos de fungos filamentosos em comunidades microbianas. Inicialmente, os experimentos foram padronizados em bactérias. Primeiro, foi feito um isolamento bacteriano de amostras de suínos em meio seletivo para E. coli e Salmonella. Para isso, estriou-se as bactérias em meio ágar XLD, utilizado para diferenciação de Salmonella e Shigella, e em meio EMB ágar, utilizado para diferenciação de bactérias gram-negativas. Fez-se um inóculo dessas mesmas bactérias e extraiu-se o DNA plasmidial por miniprep. Então, foi feito PCR com primers contendo adaptadores de PCR de fusão para os genes de resistência de clorofenicol (cmIA, catA1 e florR), tetraciclina (tetA, tetB, tetC e tetG), β- lactamicos (CTX, SHV e KPC) e o 16S como controle. Como todos os primers funcionaram, a perspectiva é inciar agora a PCR de fusão para gerar um amplicon contendo uma região do gene de resistência na 5’ e marcador taxonômica 16S para a metagenômica. |
| Palavras-chave | Metagenômica, resistência bacteriana, PCR. |
| Forma de apresentação..... | Oral |