Ciência para a Redução das Desigualdades
15 a 20 de outubro de 2018
Trabalho 9902
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciências Biológicas |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, FUNARBE |
| Primeiro autor | Eduarda Melo de Abreu Vieira |
| Orientador | RAPHAEL DE SOUZA VASCONCELLOS |
| Outros membros | JULIANA LOPES RANGEL FIETTO, Leilane Ferreira Teixeira, Nancy da Rocha Torres, Victor Hugo Ferraz da Silva |
| Título | Análises de bioinformática e clonagem do gene da SRPK de Leishmania infantum chagasi para estudos bioquímicos |
| Resumo | As Leishmanioses são um grupo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania. A Leishmania infantum chagasi é o agente etiológico da leishmaniose visceral, forma mais grave da doença que afeta o baço e o fígado. Os tratamentos atuais não são tão eficazes, apresentando altos níveis de toxicidade. As SRPK (Serine/Arginine Protein Kinase) são enzimas que possuem um papel central no controle e distribuição de fatores de splicing, além de participar na reorganização do núcleo durante a mitose e na regulação do ciclo celular. A inibição dessa enzima em outros protozoários como Plasmodium falciparum e Toxoplasma gondii, é capaz de levar esses parasitos à morte. A LicSRPK nunca foi estudada e pode ser um alvo promissor no combate da leishmaniose visceral. Este trabalho teve como objetivo buscar por SRPKs no genoma da L. infantum chagasi (LicSRPKs), comparar a sequência da LicSRPK com outros organismos, confirmar a sua expressão pelo parasito e clonar o gene em vetor de expressão para obtenção da proteína recombinante. Assim, uma busca feita no Tritryp (tritrypdb.org/tritrypdb/) por sequências homólogas a hSRPK1 (U09564) retornou com uma sequência, que foi analisada no PFAM. Para os experimentos in vitro, L. infantum chagasi foi cultivada em meio Grace's, e o RNA total foi extraído e usado para síntese de cDNA. O gene da LicSRPK foi amplificado por PCR, utilizando primers específicos com sítios de restrição para XhoI e NdeI. O produto da PCR foi então purificado em gel de agarose 1%, seguido de ligação blunt-end em vetor de clonagem pGEM-T, e transformado em Escherichia coli DH5α. Posteriormente, um clone obtido no pGEM-T foi digerido e o gene foi subclonado no vetor de expressão pET28a. As análises de bioinformática demonstram a existência de uma possível SRPK no genoma da L. infantum chagasi. O resultado no PFAM mostrou que, assim como outras SRPKs, a LicSRPK apresenta dois domínios kinase separados por uma região espaçadora, característico dessa família de enzimas. A reação de RT-PCR amplificou um fragmento no tamanho esperado confirmando a expressão da enzima pelo parasito. Os clones no pET28a foram confirmados por digestão e PCR. Já foi demonstrado em T. gondii e P. falciparum que a via da SRPK é importante para a sobrevivência e diferenciação dos parasitos. Dessa forma, esperamos avançar nesse estudo por meio da obtenção da proteína recombinante para realização de futuras análises bioquímicas, e também buscar por inibidores específicos para a LicSRPK, de forma que possamos validar novos fármacos no tratamento de leishmaniose visceral. |
| Palavras-chave | Leishmaniose visceral, SRPK, Cinase |
| Forma de apresentação..... | Painel |