Ciência para a Redução das Desigualdades
15 a 20 de outubro de 2018
Trabalho 9868
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Ciências Agrárias |
| Setor | Departamento de Zootecnia |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Larissa de Sales Araújo |
| Orientador | SIMONE ELIZA FACIONI GUIMARAES |
| Outros membros | Ingrid Soares Garcia, Nathalia Silva Dutra Alves, Walmir da Silva |
| Título | Clonagem da região promotora de um gene responsável pela característica de número de leitões nascidos em suínos. |
| Resumo | Introdução: Variantes, como os marcadores de polimorfismo de nucleotídeo único (SNPs), em regiões 5’UTR e promotoras, são importantes na expressão de genes associados a doenças em humanos e a características de importância para a produção animal, pelo fato destas regiões conterem sítios de ligação aos fatores de transcrição, essenciais para o padrão de expressão gênica. Neste estudo, clonagens em plasmídeos fizeram-se necessárias para avaliar o efeito destas mutações nos promotores e a sua capacidade de modificar sua ligação com fatores de transcrição, interferindo na montagem e estabilidade do complexo transcricional primário, com consequente alteração na expressão gênica e do fenótipo associado à um gene. Essa alteração, devido a um ou vários SNPs tem sido estudada através de análises funcionais de regiões promotoras, o que permite um maior entendimento da ação biológica do gene estudado, sendo de grande relevância para o estudo de características reprodutivas em animais domésticos. Objetivo: Clonar a região promotora do gene ENSSSCG00000009285, com os SNPs preditos e avaliação da expressão gênica dos fatores de transcrição que se ligam a esta região. Metodologia: Utilizaram-se os sítios de restrição KpnI/NcoI do vetor básico PpGL2, no qual foi clonado a região -500pb a +100pb do Gene ENSSS00000009285 fundindo-a ao gene da Luciferase. Foram construídos vetores contendo os alelos selvagens, e as variantes -12>A, -13>T, -12/-13>A, -86>A e suas combinações. As trocas de bases foram feitas a partir da utilização de mutagênese sítio dirigida. As construções foram confirmadas através das digestões dos plasmídeos e sequenciamento. Além disso, para confirmação da expressão dos fatores de transcrição preditos a se ligarem a esta região: CREB, ZID, PLAG1 e GKLF, foi feita análise de qPCR em células de linhagem primária de adipócitos de suínos, células do estroma vascular (SV) e células musculares C2C12. Resultados: Análises pós-GWAS permitiram identificar o gene ENSSSCG00000009285 e SNPs na sua região promotora. Além disso, fatores de transcrição e sua ligação à essa região foi feito por análises in silico no TFNexplorer. Esta ferramenta permitiu identificar locais de ligação de fatores de transcrição na região promotora do gene ENSSSCG00000009285. Em seguida observou-se que os quatro fatores de transcrição tiveram expressão nas células SV, indicando a possibilidade da análise funcional da região promotora. Conclusão: O ensaio funcional da região promotora do gene predito para característica número de leitões nascidos em suínos pode ser realizada nas células SV, uma vez que estas possuem as ferramentas necessárias para o ensaio. |
| Palavras-chave | número de leitões nascidos em suínos, plasmídeo, região promotora |
| Forma de apresentação..... | Oral |