Resumo |
A Doença de Chagas (DC) consiste em um grave problema de saúde pública nas Américas, estendendo-se do sul dos Estados Unidos à Patagônia, são mais de 80 milhões de indivíduos expostos à infecção e um total estimado entre 16 e 18 milhões já infectados, sendo endêmica em 18 países, entre eles o Brasil. Assim, muitos aspectos da DC demandam esclarecimentos e muitos desafios persistem ao longo dos anos, especialmente no que tange avanços terapêuticos, tais como novos fármacos, métodos diagnósticos e profiláticos. . O presente trabalho aborda a modalidade de profilaxia relacionada a elaboração de uma vacina capaz de gerar imunidade contra a infecção pelo patógeno. O grupo de pesquisa empenhou-se na abordagem da molécula E-NTPDase-1 de T. cruzi como fator de virulência envolvida na interação parasito-hospedeiro, constituindo um potencial alvo vacinal e terapêutico. Este trabalho tem como objetivo a elaboração de uma vacina de DNA recombinante capaz de gerar imunidade contra a infecção do patógeno causador da doença de Chagas. Dentre os objetivos, a produção de proteína recombinante NTPDase-1 e DNA plasmidial codificando a mesma. Bem como a avaliação da imunogenicidade gerada por protocolo de “prime-boost”, pela produção de anticorpos e fenotipagem de células esplênicas. A divulgação em eventos Científicos e publicações em revistas científicas também são objetivos almejados por esse trabalho. Para avaliação da presença de anticorpos específicos contra NTPase foi realizado dosagem de IgG total, IgG1 e IgG2a por ELISA a partir do soro de animais imunizados. A presença de células T CD4+ e T CD8+ total e com fenótipo de memória foi determinada por citometria de fluxo utilizando anticorpos específicos. Os resultados alcançados por este trabalho foram que nos modelos animais utilizados, animais imunizados com a rNTPDase-1 apresentaram um cinética de produção de IgG total, IgG1 e IgG2a, superior aos animais do grupo prime-boost e controle. Não houve alteração na frequência de células T CD4+ total, houve aumento significativo de T CD8+ total, no grupo Prime-boost em relação aos outros dois grupos. Aumentou significativamente a população de células ativadas no grupo imunizado com proteína comparado ao grupo Prime-boost. Houve uma porcentagem maior de células T CD4+ e CD8+ com fenótipo de memória, quando comparado ao grupo controle. A conclusão até o presente momento é que a proteína NTPDase-1 recombinante foi sintetizada pureza adequada para a imunização dos animais. O DNA plasmideal foi obtido de forma adequada. O protocolo de imunização “prime-boost” teve melhor cinética de produção de anticorpo específico IgG, comparado ao protocolo com três doses de proteína recombinante. A imunização com três doses de proteína recombinante foi eficaz em induzir ativação de linfócitos CD4 e CD8. |