Ciência para a Redução das Desigualdades
15 a 20 de outubro de 2018
Trabalho 9425
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciências Biológicas |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PET |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Primeiro autor | Italo de Andrade Bianchini |
| Orientador | LUCIANO GOMES FIETTO |
| Outros membros | Lavínia Martins da Silva, Murillo Peterlini Tavares, Riziane Ferreira Gomes |
| Título | Produção, purificação e caracterização cinética de amilase produzida por Penicillium pinophilum utilizando farelo de trigo como meio indutor |
| Resumo | As amilases são enzimas que atuam sobre o amido, hidrolisando-o em moléculas menores. As amilases têm sido empregadas em diversos processos industriais, tais como na sacarificação do amido, na produção de bebidas e de etanol e nas indústrias têxteis. Existem várias fontes de amilases sendo os microrganismos os mais utilizados para a sua produção. Dentre estes, os fungos filamentosos se mostram muito promissores devido a sua capacidade de produção em larga escala e sua facilidade de secreta-las para o meio externo. O Penicillium pinophilum é um fungo filamentoso já utilizado em alguns processos biotecnológicos e com um alto potencial para a produção de enzimas de interesse industrial, como a amilase, sendo necessário para isso apenas a utilização de um meio indutor rico em amido. Nesse contexto, o uso do farelo de trigo, um subproduto da indústria de farinha de trigo com baixo valor agregado, é uma alternativa promissora, visto que sua composição é rica em carboidratos, como o amido. Desse modo, os objetivos desse trabalho foram induzir a produção da amilase pelo Penicillium pinophilum, utilizando farelo de trigo, extrair e purificar essa enzima e realizar a sua caracterização cinética. Para alcançar esses objetivos, foi realizada a indução da produção de amilase durante 7 dias utilizando farelo de trigo. Após a produção a amilase foi extraída e purificada com as técnicas de precipitação, cromatografia de gel-filtração e troca iônica. Posteriormente foi realizada a caracterização cinética dessa enzima, determinando características da mesma como temperatura e pH ótimos, KM e Vmax, efeito de íons e a sua termoestabilidade. Ao final das etapas de purificação foi realizado um SDS-PAGE para confirmar a pureza da amostra. Após a purificação da amilase, foi obtido um índice de purificação de 15,2 vezes e um rendimento de 8,68%, sendo essa pureza confirmada pelo SDS-PAGE. Além disso, sua temperatura e pH ótimos foram iguais a 55 ºC e 5,0, respectivamente. Na determinação de parâmetros e constantes cinéticas foi determinado que seu KM é igual a 2,13 g/L e sua Vmax é de 9,76 U/mL, sendo observado também que íons divalentes atuam ativando a enzima, exceto cobre, que assim como EDTA atuam inibindo a atividade da amilase. Por fim, os ensaios de termoestabilidade mostraram que a enzima é estável a 45 °C por mais de 24 horas. Concluindo, foi possível demonstrar que o Penicillium pinophilum pode ser utilizado para a produção de amilases e que o farelo de trigo pode ser utilizado como um meio indutor para alcançar esse objetivo, transformando assim esse produto de baixo valor agregado em um meio de obtenção de um produto com alto valor agregado. |
| Palavras-chave | amilase, Penicillium pinophilum, farelo de trigo |
| Forma de apresentação..... | Painel |