Ciência para a Redução das Desigualdades
15 a 20 de outubro de 2018
Trabalho 10729
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciências Biológicas |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Vinicius Medina Pinheiro |
| Orientador | SERGIO OLIVEIRA DE PAULA |
| Outros membros | Ingrid Marques Dias, John Willians Oliveira Prates, Mariana Fonseca Xisto |
| Título | Transformação genética de Escherichia coli top 10F com vetor recombinante pUC57_DIIIEZIKV contendo o gene do domínio III da proteína estrutural E de Zika vírus otimizada para a expressão em Pichia pastoris. |
| Resumo | O Zika vírus (ZIKV) é um arbovírus que pode ser transmitido para humanos por meio da picada de mosquitos do gênero Aedes principalmente. A contaminação também pode acontecer por via sexual, transfusão sanguínea, mordida de animais contaminados e até transmissão intrauterina. As manifestações clínicas da infecção pelo ZIKV apresentam um quadro geralmente inespecífico que pode ser confundido com outras arboviroses. Os sintomas podem durar em média de dois a sete dias e são mais comumente relatados como febre, conjuntivite, dor de cabeça, mialgia e erupção cutânea. Apesar da infecção pelo ZIKV causar uma doença moderadamente leve, ela também está associada com complicações graves, como a síndrome de Guillain-Barré e a microcefalia neonatal em índices consideráveis. No Brasil houve um surto da doença em 2015, e até agora foram registrados 137.288 casos confirmados de infecção pelo vírus. Em 2016, a Organização Mundial da Saúde declarou a pandemia do ZIKV como uma Emergência em Saúde Pública de Preocupação Internacional. O ZIKV pertencente à família Flaviviridae tem a forma de um icosaedro envelopado, contendo um RNA genômico de fita simples, o qual codifica uma poliproteína que é clivada para dar origem as proteínas estruturais (prM/M, E e C) e não estruturais (NS1 a NS5). A Proteína E apresenta domínios estruturais dos quais o domínio III atua diretamente na ligação do vírus ao receptor celular, representando o maior alvo para neutralização dos anticorpos. Dessa forma o domínio III da proteína E (DIIIE) é um alvo importante para estudos de neutralização da infecção, produção de vacinas e também diagnóstico. O objetivo do presente trabalho foi transformar E. coli TOP 10F com o vetor pUC 57 que contém a sequência gênica DIIIEZIKV otimizada para expressão em levedura Pichia pastoris. O plasmídeo pUC57_DIIIEZIKV foi adquirido da empresa GenomeTM, e contém marca de seleção para ampicilina. As E. coli TOP 10F foram colocadas em contato com o plasmídeo, incubadas no gelo por 10 minutos, e em seguida colocadas no banho seco à 42 ᵒC para transformação por choque térmico. Foram cultivadas em meio LB sólido seletivo, com ampicilina e após, o plasmídeo foi extraído, purificado e quantificado. Os próximos passos serão a clonagem do gene DIIIEZIKV no vetor de expressão em P. pastoris pPICZαA, e posterior transformação da levedura para expressão da proteína que será empregada no estudo imunológico de neutralização do Zika vírus. |
| Palavras-chave | Zika vírus expressão heteróloga, Pichia pastoris, E. coli |
| Forma de apresentação..... | Painel |