Resumo |
Fitopatógenos como fungos e bactérias causam prejuízos diretos em produtos, perdas nas colheitas e também afetam o agronegócio de forma indireta, como pode ser observado pelas barreiras comerciais impostas pelos grandes países importadores sobre produtos que utilizam agrotóxicos para produção ou armazenamento. Mikania glomerata, o guaco, pertence à família Asteraceae e é uma planta que é comumente utilizada na medicina popular para diversas afecções, como febre, desconforto estomacal, reumatismo, tosse e outras doenças do trato respiratório. O efeito inibitório do gênero Mikania contra microrganismos de importância clínica, como Candida sp. e Streptococcus mutans, tem sido cada vez mais estudado. Pesquisas anteriores realizadas no Laboratório de Proteômica e Bioquímica de Proteínas apresentaram resultados expressivos relacionados à eficácia antimicrobiana do guaco, indicando a possível existência de defensinas ou outros peptídeos de baixa massa molecular com possível aplicação tecnológica. Parte deste trabalho teve o objetivo de confirmar a presença de defensivas nos extratos por sequenciamento De Novo dos espectros de MS2 e comparação com sequências de defensinas de outras plantas da família Asteraceae, por análises com ferramentas computacionais. Como esses esforços não renderam resultados satisfatórios, este projeto também visa recriar as condições de trabalho do estudo anterior e realizar a extração, purificação e a identificação destes peptídeos antimicrobianos (AMPs) advindos de extratos aquosos de Mikania glomerata. O extrato aquoso foi preparado de folhas de guaco colhidas no horto de plantas medicinais do grupo Entre Folhas na UFV, foram determinadas as proteínas totais pelo método do Ácido Bicinconímico, seguindo-se aquecimento seletivo a 80ºC por 15 min. As amostras, antes e depois do aquecimento, estão sendo analisadas em gel SDS-PAGE 14%T e 3%C para confirmar as massas moleculares baixas desses peptídeos, seguindo-se análises por eletroforese bidimensional (2-DE) ou por HPLC e identificação dos peptídeos por MALDI-TOF/TOF (MS1 e MS2) e sequenciamento De Novo. Após a identificação das sequências, será avaliada a possibilidade de purificação parcial (enriquecimento) do(s) AMP(s) identificados com o intuito de utilizar o peptídeo purificado como agente ativo em um produto com ação antimicrobiana, para uso em combinação com outros agentes de defesa. (Apoio financeiro: FAPEMIG, CNPq, FINEP e CAPES. Apoio técnico: DBB/UFV, NuBioMol/UFV e BIOAGRO/UFV). |