Ciência para a Redução das Desigualdades
15 a 20 de outubro de 2018
Trabalho 10506
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciências Biológicas |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Geniana da Silva Gomes |
| Orientador | GUSTAVO COSTA BRESSAN |
| Outros membros | Maria Roméria da Silva, Mônica Maria Magalhães Caetano |
| Título | Avaliação da interação in vitro entre Serine Arginine Protein Kinases (SRPKs) e a proteína reguladora de actina Swiprosin-1 |
| Resumo | Serine Arginine Protein Kinases (SRPKs) estão envolvidas na regulação do splicing do pré-mRNA pelo reconhecimento e fosforilação das proteínas SR. Alterações no padrão de expressão ou atividade dessas proteínas estão associadas a mecanismos que controlam a progressão de alguns tipos de tumores. Especificamente, SRPK1 e SRPK2 são encontradas superexpressas em tumores como melanoma, leucemia, câncer de pulmão e cólon. Neste sentido, estudos envolvendo as SRPKs são considerados importantes para o desenvolvimento de novas estratégias antitumorais. Um ensaio de duplo-híbrido em leveduras realizado pelo nosso grupo de pesquisa mostrou uma possível interação entre SRPK2 e Swiprosin-1, uma proteína responsável por regular a despolimerização dos filamentos de actina através da regulação do acesso de cofilina à F-actina. Swiprosin-1 está superexpressa em diferentes tumores como melanoma, câncer de cólon e pulmão, e atua na reorganização do citoesqueleto de actina e migração celular, favorecendo o processo de formação de metástase nesses tumores. A investigação da interação entre SRPKs e Swiprosin-1, portanto, pode desvendar mecanismos realacionados a essas proteínas na formação de metástases. Sendo assim, esse trabalho teve como objetivo a realização do ensaio de pulldown para confirmar a interação in vitro entre SRPK2 e Swiprosin-1. Todas as proteínas utilizadas no ensaio foram expressas em Escherichia coli BL21: 6xhis-SRPK2, GST-Swiprosin-1 e GST (controle negativo do ensaio de interação). Para o ensaio de pulldown, 6xhis-SRPK2 foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna carregada com resina de níquel, utilizando o sistema FPLC. As proteínas GST-Swiprosin-1 ou GST obtidas a partir da fração solúvel do lisado foram ligadas à resina de glutationa-sefarose e incubadas com 6xHis-SRPK2 purificada. Para a detecção das proteínas foi realizado Western blotting utilizando os anticorpos primários anti-His e anti-GST. Foi verificada a interação entre 6xhis-SRPK2 e GST-Swiprosin-1 tal como esperado, o que nos permitirá avançar em outros estudos que investiguem mais profundamente a relação entre essas proteínas no contexto de tumores metastáticos. |
| Palavras-chave | SRPK, Swiprosin-1, Melanoma |
| Forma de apresentação..... | Oral |