Ciência para a Redução das Desigualdades
15 a 20 de outubro de 2018
Trabalho 10400
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciências Agrárias |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Lavínia Martins da Silva |
| Orientador | MARIA CRISTINA BARACAT PEREIRA |
| Outros membros | Camilo Jose Ramirez Lopez, Cleonice Aparecida Salgado, Júlia Coutinho Andrade, Wassali Valadares de Sousa |
| Título | Purificação visando caracterizar HEV-CANN e confirmação da sequência N-terminal |
| Resumo | Peptídeos antimicrobianos (AMPs) vegetais são importantes componentes da defesa de plantas, e caracterizam-se por serem em geral pequenos (até 10 kDa), ricos em resíduos de cisteínas e ligações dissulfeto, e catiônicos. Apresentam ação contra fitopatógenos como parte da defesa constitutiva ou induzida. Plantas da família das solanáceas têm se mostrado importantes fontes de AMPs. Pesquisa prévia no Laboratório de Proteômica e Bioquímica de Proteínas dessa Universidade identificou o peptídeo nomeado HEV-CANN, que é uma heveina-like de pimentão (Capsicum annuum) da variedade comercial 'Magali R', com ação antifúngica e antibacteriana. O pimentão é um alimento muito consumido e que recebe grande quantidade de produtos químicos durante o cultivo, havendo interesse em conhecer o potencial dos AMP na defesa destas plantas. O objetivo desse trabalho foi purificar e confirmar a sequência primária de HEV-CANN, visando proceder caracterizações estruturais e funcionais para aplicações biotecnológicas futuras. Usando dados da literatura, realizou-se uma análise de mineração de dados manual em bases de dados de proteínas em geral e de peptídeos, e foi possível confirmar que a sequência sugerida dos 10 resíduos da região N-terminal de HEV-CANN está de acordo com a de outras heveínas de solanáceas e de outras espécies vegetais. Estudos de modelagem molecular usando Phyre2 e Geno3D também confirmaram a similaridade da estrutura de HEV-CANN com o AMP heveína de Hevea brasiliensis. Para análises funcionais, novo extrato preparado com folhas de pimentão foi separado por cromatografia de troca iônica usando tampão Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, em coluna Waters Spherisorb SCX (80Å, 5 µm, 4.6 mm X 250 mm) e equipamento HPLC semi-preparativo (Waters Corporation). Frações dos picos de interesse foram coletadas com base no perfil cromatográfico a 214 e 280 nm e analisadas por espectrometria de massas (MS1 e MS2) do tipo MALDI-TOF/TOF em equipamento Ultraflex III (Bruker Daltonics), no Núcleo de Análises de Biomoléculas da UFV, usando matriz ácido α-ciano-4-hidroxicinâmico em placa de aço MTP Anchor Chip TM 600/384 TF (Bruker Daltonics). A fração enriquecida com o peptídeo de interesse está sendo submetida a sequenciamento por MS1 e MS2, analisada quanto ao grau de pureza, e serão utilizadas para avaliar a potencialidade do agente antimicrobiano e estudar mecanismos de ação, visando estudos para aplicação biotecnológica. (Apoio financeiro: FAPEMIG, CNPq, FINEP e CAPES. Apoio técnico: DBB/UFV, NuBioMol/UFV e BIOAGRO/UFV). |
| Palavras-chave | Peptídeos, solanáceas, pimentão |
| Forma de apresentação..... | Oral |