Ciência para a Redução das Desigualdades
15 a 20 de outubro de 2018
Trabalho 10303
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Ciências Agrárias |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Samuel Lessa Barbosa |
| Orientador | MARIA GORETI DE ALMEIDA OLIVEIRA |
| Outros membros | Carolina Rocha da Silva, HUMBERTO JOSUE DE OLIVEIRA RAMOS, João Vitor Aguilar de Oliveira, Juan Diego Rios Diez |
| Título | Caracterização cinética de inibidores de serino e cisteino proteases presentes na hemolinfa de Anticarsia gemmatalis |
| Resumo | Os inibidores de proteases estão em todos os eucariotos, em algumas plantas e vírus. Tais inibidores são de importância fundamental na regulação dos processos biológicos, limitando a ação das proteases. Eles podem ser de ampla ação, dentre elas, atuam como substrato específicos, no caso dos componentes de uma cascata enzimática. Em diversas espécies de insetos, encontram-se inibidores de proteases em vários tecidos, tais como, no tegumento, nas gônadas, nas glândulas salivares e na hemolinfa. Os presentes neste último, desencadeiam uma reação em cascata, que, no momento em que há uma invasão de microrganismos, sua ação permite controlar a infecção. Tal regulação é feita por meio do controle das enzimas proteolíticas, pelo qual o sistema reconhece os patógenos, regula a coagulação da hemolinfa, gera a síntese de peptídeos antimicrobianos e a melanização para encapsulação dos patógenos. O objetivo deste trabalho foi identificar a cinética de inibição, o Ki e a estabilidade dos inibidores para a Tripsina-like e Papaína-like presentes na hemolinfa de Anticarsia gemmatalis. Para isso foi coletada, com ajuda de micropipeta Pasteur, a hemolinfa de 300 lagartas deste inseto, no segundo dia do quinto instar. Para realização desta coleta, foram cortados os últimos pares de falsas pernas abdominais das lagartas. Para evitar a coagulação da hemolinfa, o fluido foi misturado com feniltiouréia (PTU), na proporção 1:50 (PTU: Hemolinfa), e levado a centrifugação 15.000 rpm/15 min, para eliminar os hemócitos presentes. Imediatamente foi obtido 5 mL do plasma ou Hemolinfa Livre de Hemócitos (HLH). A HLH foi submetida a três tipos cromatografias (afinidade, dessalinização e troca iônica), além da separação pela massa na etapa final. Os processos de purificação foram acompanhados por ensaios de inibição para três modelos: proteases intestinais do próprio inseto, tripsina bovina comercial e papaína comercial. As frações que proporcionaram resultados positivos para inibição foram submetidas a eletroforese unidimencional com intuito de analisar a eficiência da purificação. Para a determinação dos parâmetros cinéticos e a estabilidade dos inibidores, a atividade foi medida em diferentes concentrações dos inibidores, do substrato, em várias faixas de pH e temperatura. Para a papaína a inibição foi caracterizada como reversível incompetitiva, e foi obtido Ki de 8,79 µg/s. Para a tripsina a inibição foi definida como reversível competitiva, apresentando Ki de 2,65 µg/s para tripsina bovina e de 0,09µg/s para tripsina-like do inseto. Os inibidores foram estáveis nas faixas de pH e temperatura testados, assim a atividade inibitória ficou sem mudanças significativas entre 7,2 - 8,2 de pH e em temperatura menor de 70ºC. Com base nos resultados obtidos, abre-se uma nova alternativa na procura de peptídeos para serem utilizados como ferramentas no controle de insetos-praga. Agradecimentos: CNPq, FAPEMIG, INCT-Interação Planta Inseto. |
| Palavras-chave | Lagarta-da-soja, Inibidores de proteases, Parâmetros cinéticos. |
| Forma de apresentação..... | Oral |